[其他]通用的核酸内切限制酶

权利要求书

1、一种能在靶DNA的一个预定的位点上裂解该DNA的通用的核酸内切限制酶，它包括：

(a)一种寡脱氧核糖核苷酸接合体；及

(b)一种适当的限制性酶。

2、权利要求1的通用的核酸内切限制酶，其中寡脱氧核苷酸接合体及限制性酶是以共价相结合。

3、权利要求1的通用的核酸内切限制酶，其中寡脱氧核苷酸接合体仿制存在于限制性酶上的识别位点与裂解位点之间的关系。

4、权利要求1的通用的核酸内切限制酶，其中限制性酶是由BbyⅠ，BbvⅡ，BinⅠ，FokⅠ，HgaⅠ，HphⅠ，MboⅡ，MnlⅠ，SfaNⅠ，TagⅡ或Tth111Ⅱ的酶组中选择出的一种类-Ⅱ酶。

5、权利要求4的通用的核酸内切限制酶，其中限制性酶是FokⅠ。

6、权利要求4的通用的限制性酶，其中寡脱氧核苷酸接合体含有一种与限制性酶的识别位点相关的双股核苷酸序列以及一种与靶DNA的预定的位点互补的单股核苷酸序列。

7、权利要求1的通用的核酸内切限制酶，其中限制性酶是从EcoP1，EcoP15，HineⅠ或HinfⅢ的酶组中选出的一种类-Ⅲ酶。

8、权利要求7的通用的限制性酶，其中寡脱氧核苷酸接合体包含一种与限制性酶的识别位点相关的双股核苷酸序列以及一种与靶DNA预定的位点互补的单股核苷酸序裂。

9、一种在一个预定的位点上裂解靶DNA的方法，包括使靶DNA与改变了的核酸内切限制酶相连接。

10、权利要求9的方法，其中改变了的核酸内切限制酶包括：

（a）一种寡脱氧核苷酸接合体;及

（b）一种适当的限制性酶。

11、权利要求10的方法，其中寡核苷酸结合体与限制性酶是以共价相结合。

12、权利要求10的方法，其中寡核苷酸结合体包含一种与限制性酶识别位点相关的双股核苷酸序列及一种与靶DNA的预定位点互补的单股核苷酸序列。

13、权利要求10的方法，其中改变了的核酸内切限制酶与靶DNA相连接包括：

（a）将寡脱氧核苷酸接合体复合到靶DNA的预定位点上;及

（b）将适当的限制性酶加到DNA-接合体复合物中。

14、权利要求13的方法，其中靶DNA是单股的。

15、权利要求14的方法，包括进一步在加入适当的限制性酶之前沿着单股靶DNA延长寡脱氧核苷酸接合体的3′-OH末端，以形成含有预定切割点的双股DNA的方法。

16、权利要求10的方法，其中寡脱氧核苷酸接合体与限制性酶相复合，而其连接包括酶-接合体复合物与靶DNA相复合。

17、权利要求16的方法，其中靶DNA是单股的。

18、权利要求17的方法，包括进一步将寡脱氧核苷酸的3-OH末端沿着单股DNA延长以形成含有预定的切割位点的一种双股DNA，然后此种双股DNA被酶接合体复合物的适当的限制性酶切割。