[发明专利]生产L-山梨糖的方法

说明书

本项发明是关于L-山梨糖的产生菌和L-山梨糖的生产方法，特别是使用既能从D-山梨醇产生L-山梨糖、又降低了利用D-山梨醇作为唯一碳源生长能力的葡糖酸杆菌属（Gluconobacter）的菌株生产L-山梨糖的方法。

本项发明的目的是提供一项在维生素C合成中的一个重要中间体L-山梨糖的工业上经济的生产方法。

现在L-山梨糖是用微生物氧化D-山梨醇生产的，所使用的微生物主要是葡糖酸杆菌属中的细菌。在用发酵法生产L-山梨糖的常规生产方法中，以D-山梨醇作为原料，L-山梨糖的产量超过90%，但副产品如：D-果糖，5-酮基果糖，2-酮基-D-葡萄糖酸和低分子有机酸也同时产生;从所希望的产率出发，这个方法不能认为是完美的。

因此，在维生素C的工业生产中，要减少原料的费用，一个很重要的问题是提高D-山梨醇到L-山梨糖的转化率。

在这种情况下，本项工作的发明者为提高L-山梨糖的发酵率做了许多研究工作，并发现：通常用于生产L-山梨糖的葡糖酸杆菌属的菌株经诱变后产生的菌株降低了用D-山梨醇作单一碳源生长的能力，并明显地提高了由D-山梨醇到L-山梨糖的转化能力，因而发展了本项发明。

本项发明中的一个目的是提供用具有降低了以D-山梨醇为单一碳源生长能力的葡糖酸杆菌属的菌株生产L-山梨糖的方法。另外一个目的是提供用于上述生产方法中的L-山梨糖产生菌。

任何微生物，只要它们属于葡糖酸杆菌属，并具有产生L-山梨糖的能力和降低了利用D-山梨醇作单一碳源生长能力，都可以应用于包括在本项发明的生产方法中。这类微生物可以由葡糖酸杆菌属中产L-山梨糖的菌做亲株经诱变而得到。可以做为这类亲株的微生物菌种例示之可列成下表。

种名    菌株号

氧化葡糖酸杆菌    IFO3189，IFO12467

（Gluconobacter    oxydans）

弱氧化葡糖酸杆菌    IFO3254，IFO3255

（Gluconobacter    oxydans）    IFO3256，IFO3257

IFO12528

生黑葡糖酸杆菌    IFO3292，IFO3293

（Gluconobacter    melanoge-    IFO3294

nus）

白色葡糖酸杆菌    IFO3250，IFO3253

（Gluconobacter    albidus）

荚膜葡糖酸杆菌    IFO3462

（Gluconobacter    capsulat-

us）

蜡色葡糖酸杆菌    IFO3263，IFO3264

（Gluconobacter    cerinus）    IFO3265

种名    菌株号

二氧丙酮葡糖酸杆菌    IFO3271，IFO3274

（Gluconobacter    dioxyace-

tonicus）

葡萄糖酸葡糖酸杆菌    IFO3285，IFO3286

（Gluconobacter    gluconic-

us）

工业葡糖酸杆菌    IFO3260

（Gluconobacter    industrius）

非氧化葡萄糖酸葡糖酸杆菌    IFO3275，IFO3276

（Gluonobacter    nonoxygluc-

onicus）

注：上述菌株都是已知菌，都列在“菌种目录”第七版，1984，

日本大阪发酵研究所（IFO）出版。

用于本项发明中的微生物可以很清楚的同它们的亲株区分开，因为它在含有D-山梨醇为单一碳源的无机盐培养基中生长特别慢。不管培养基是液体还是固体都是这样。当使用固体培养基时，平板复制培养法会很方便的把它们与亲株区分开。如果使用液体培养基，可将本项发明中涉及的微生物接种于以D-山梨醇为单一碳源的无机盐培养基中，其培养条件与亲株使用的条件相同，一般是在30℃，震荡培养1-3天。根据培养物的光吸收值，混浊度或者细胞的重量测定其培养结果即生长程度就可以很方便的把这些微生物同它们的亲株区分开。本项发明中所用的微生物也会生长，但其生长程度比它们的亲株要低;其生长程度比亲株的1/10还低，那就更好了。

本项发明中的微生物很容易通过一般的方法被诱变和分离。