[发明专利]赤豆叶肉原生质体分离培养与绿苗分化技术

权利要求书

1、一种赤豆叶肉原生质体培养分化的方法，采用赤豆无菌真叶为游离原生质体材料，由混合酶液酶解得原生质体，经过原生质体培养、愈伤组织扩增和分化等步骤获得绿苗，其特征在于：

(1)原生质体培养基中包含下述组分：

-0.5-0.65M浓度的葡萄糖作为碳源和渗透压稳定剂；

--无机盐成分：600～1000mg/L的CaCl₂·2H₂O，1200～1500mg/LKNO₃，200-300mg/L的NH₄NO₃，60～90mg/L的KH₂PO₄，600～900mg/L的MgSO₄；

--维生素成分0.02～0.08mg/L的生物素，0.1～0.8mg/L的叶酸，100～200mg/L的肌醇，3.0～3.5mg/L的盐酸硫胺素，0.5～0.8mg/L的盐酸吡哆素，1.0～2.0mg/L的甘氨酸，3.0～4.0mg/L的烟酸；

--植物激素成分：2，4-二氯苯氧乙酸，α一萘乙酸，6-苄氨基嘌呤和玉米素，用量各为0.3～1mg/L；

(2)愈伤组织扩增培养基中含有如下植物激素成分：0.2-0.5mg/L的-苄氨基嘌呤，1-3mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸；

(3)愈伤组织分化培养基中含有如下植物激素成分：1-5mg/L的6-苄氨基嘌呤。

2、根据权利要求1所述的赤豆叶肉原生质体培养分化的方法，其特征在于混合酶解液中含有如下成分;0.5%-1%（W/V）的纤维素酶，0.5%-1%（W/V）的半纤维素酶，酶解叶片的温度是25°～27℃，经酶解12-16小时后用400目不锈钢丝网过滤得原生质体。