[其他]多肽,DNA及其应用无效

专利信息
申请号: 87101862 申请日: 1987-03-13
公开(公告)号: CN87101862A 公开(公告)日: 1987-10-21
发明(设计)人: 黑川勉;佐佐田玲子;岩根里;五十岚贡一 申请(专利权)人: 武田药品工业株式会社
主分类号: C12N15/00 分类号: C12N15/00;C12P21/02
代理公司: 中国国际贸易促进委员会专利代理部 代理人: 顾柏棣,辛敏忠
地址: 日本大阪*** 国省代码: 暂无信息
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摘要:
搜索关键词: 多肽 dna 及其 应用
【说明书】:

发明关系到一人类初级成纤维细胞生长因子(本文中有时称为“hbFGF”)及用遗传工程技术产生hbFGF的一种方法。

初级成纤维细胞生成因子(b    FGF)是一种初级多肽激素,主要从脑下垂体分泌,分子量约17,000。首先是作为一种因子分离到,其对例如BALB/C3    T3细胞的成纤维细胞显示出潜在的生长促进作用。(D.Gospodarowicz:Nature,249,123(1974))。然而,后来发现它几乎对所有中胚层衍生细胞均显现出生长促进作用。(D.Gospodarowicz    et    al.:National    Cancer    Institnte    Monograph,48,109(1978)]在另一些细胞中b    FGF的维管活性以及它的细胞生长促进活性表明它可用作病灶治疗剂,以及作为血栓形成,动脉狭窄及类似病症的预防和治疗剂的可能性,然而,天然存在的hbFGF量非常少,许多限制使得从人类组织中得到这种因子遇到严重困难。因而,hbFGF的氨基酸顺序尚未确定。

另一方面,动物产生的b    FGF,(相对人类b    FGF较易得到),已经从例如牛垂体纯化得到,其氨基酸顺序也已确定。[F.Esch    et    al.:Proceedings    of    the    National    Academy    of    Sciences    of    the    United    States    of    America(Proc.Natl.Acad.Sci.USA),82,650)(1985)]。然而,在这种情况下,大量生产也非常困难。

如上所述,hbFGF的特性氨基酸顺序,相关基因,还大部分未弄清楚。因此,为能将它作为药物使用,迫切需要寻找编码该因子的基因,研究出一种采用基因工程技术大量生产该蛋白质的方法。

通常,从接近于人类的动物体内得到的蛋白质的氨基酸顺序与人类的相应蛋白质具有高度同源性,并且,在大多数情况下,差异的氨基酸是由密码子点突变衍生而得。因此,很有可能,上述牛b    FGF氨基酸顺序推演得到的DNA顺序与hbFGF基因的DNA顺序某种程度上应非常相似,尽管由于密码子兼并可能有许多DNA顺序。基于这种假设,本发明合成了具有可能的核苷酸顺序的b    FGF基因的一部分,用这部分b    FGF基因作为DNA探针从人类细胞中克隆出hbFGF的c    DNA,并构造了一种含有所述hbFGFcDNA的重组DNA。这样就发现,培养从上述DNA转化得到的转化子可以产生hbFGF。本发明者在这些发现的基础上进行进一步的研究,结果现已完成了本发明。

因此,本发明提供:(1)人类初级成纤维细胞生长因子(Ⅱ),其为一多肽,氨基酸顺序如下:

Pro-Ala-Leu-Pro-Glu-Asp-Gly-

Gly-Ser-Gly-Ala-Phe-Pro-Pro-

Gly-His-Phe-Lys-Asp-Pro-Lys-

Arg-Leu-Tyr-Cys-Lys-Asn-Gly-

Gly-Phe-Phe-Leu-Arg-Ile-His-

Pro-Asp-Gly-Arg-Val-Asp-Gly-

Val-Arg-Glu-Lys-Ser-Asp-Pro-

His-Ile-Lys-Leu-Gln-Leu-Gln-

Ala-Glu-Glu-Arg-Gly-Val-Val-

Ser-Ile-Lys-Gly-Val-Cys-Ala-

Asn-Arg-Tyr-Leu-Ala-Met-Lys-

Glu-Asp-Gly-Arg-Leu-Leu-Ala-

Ser-Lys-Gys-Val-Thr-Asp-Glu-

Cys-Phe-Phe-Phe-Glu-Arg-Leu-

Glu-Ser-Asn-Asn-Tyr-Asn-Thr-

Tyr-Arg-Ser-Arg-Lys-Tyr-Thr-

Ser-Trp-Tyr-Val-Ala-Leu-Lys-

Arg-Thr-Gly-Gln-Tyr-Lys-Leu-

Gly-Ser-Lys-Thr-Gly-Pro-Gly-

Gln-Lys-Ala-Ile-Leu-Phe-Leu-

Pro-Met-Ser-Ala-Lys-Ser(Ⅰ)

(2)重组DNA(Ⅲ)其含有编码人类初级成纤维细胞生长因子(Ⅱ)的碱基顺序;

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