[其他]测定凝集参数用的试验载体和方法

说明书

本发明涉及测定所谓凝集参数用的试验载体，即分析血液中影响凝集过程的组分用的试验载体。

对于体液成份的定性定量分析测定，其中尤其对血液的分析，所谓载体结合试验的应用，最近愈来愈普遍。在这些试验中，将试剂引入固体试验载体的适当层次中，与样品进行接触。样品和试剂的反应产生可检测的信号，尤其是颜色的变化，这可通过视觉辨别或通过仪器，经常采用光学反射方法测量。

试验载体常做成试验条，这种试验条主要由合成树脂材料的纵向载体层和其中所涂的试验区组成。但试验载体也常常做成方形或矩形小板。

欧州专利说明书0045476号叙述了从全血分离血浆或血清用的试剂和方法，尤其是用于体液成分（所谓参数）诊断测定用的试验载体，使用该种载体就使以简单的方式测定全血的组分成为可能。按照本发明的说明书，血浆可与红血球分离，其方法是让全血流经纤维直径小于2.5μm的玻璃纤维层，这些纤维可阻止红血球通过。因而最好将血液加到矩形玻璃纤维毛的一端，血浆由此经毛细作用力被输送到该装置的其它部位。血浆分离以后，充满血浆的纤维毛被受压通过含必需试剂的基质（纸、吸收薄膜等），在该基质中，进行用缓解测量法测定待检测参数的检测反应。

这一简单的血浆获取和输送方法可用于测定所有重要的临床化学参数，只有在测定研究止血学问题范围内的参数时是例外。众所周知，凝集分析在原则上是要在合成树脂容器或涂硅酮树脂以失活的玻璃容器内进行，因为未经处理的玻璃会影响血液和血浆的共凝集能力。因此，即使凝集因子处于正常范围内，由于玻璃的活化作用，可缩短血浆的奎克一期的凝集时间，至于在凝集因子含量较低的血浆情况下，奎克一期凝集时间会由于凝集因子的失活而延长。尤其是玻璃会使第Ⅴ和第Ⅱa因子失活。由于这种失活作用并由此产生凝集时间假性延长，使诊断的有效性因各个凝集因子的比例的改变而失效。以百分率表示的奎克值，除包括纤维蛋白原浓度外，也包括第Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ和第Ⅹ因子的活性。将从健康供体取得的混合血浆定为100%的血浆，用生理盐水稀释，制备出合适的较低百分率的血浆。通过这种稀释系列，可作出一条参考曲线，据此可测出病人血浆的奎克值。

然而，部分促凝血激酶时间（PTT）也受第Ⅻ和第Ⅺ因子失活的相反影响。抗凝血酶Ⅲ和肝素的检测会由于玻璃引起的凝血酶的失活而受很大干扰。

因此，本发明的目的之一是提供玻璃纤维层，这些玻璃纤维层特别适用于试验载体中的分离和输送体系，由于这些玻璃纤维层不影响凝集，因而适用于止血学研究。所以最好要保留它们的分离输送性能。

因此，按照本发明，可提供测定凝集参数用的试验载体，其中包括一层涂以聚乙烯醇或聚乙烯醇/乙烯基乙酸酯的玻璃纤维的试验层。

本发明也提供一种制造玻璃纤维层的方法，特别是制造按照本发明所述的试验载体用的玻璃纤维层的方法，其中包括使玻璃纤维在过量的水中与加入的聚乙烯醇形成浆液，按常规的造纸方法形成一层纤维层，并在升高的温度下干燥。

而且，本发明还提供一种测定血液的凝集参数的方法，其中包括将血液通过含有涂以聚乙烯醇或聚乙烯醇/乙烯基乙酸酯的玻璃纤维的玻璃纤维层的处理步骤。

我们已经发现，玻璃表面可通过加入聚乙烯醇而使之变性，使其保留亲水性，这一性能对例如玻璃纤维毛等物质的吸收能力是必需的，但丧失了它们对凝集因子的影响，即使之不影响凝集。这一点尤其有价值，因为人们知道，玻璃表面可通过用硅酮树脂乳液硅化处理使表面涂覆，因而排除了玻璃对凝集因子的影响，但这种渗硅处理在玻璃纤维的特殊情况下，会使表面产生高度憎水而使湿润不再发生，因而纤维完全损失了对血浆的输送能力和对红血球的分离能力。

聚乙烯醇是由聚乙烯乙酸酯皂化生成的，皂化中，根据产品的所需性能，可进行完全皂化或部分皂化。根据本发明的用法，既可采用完全皂化产物，也可采用部分皂化产物。从商业上可大量买到的聚乙烯醇，特别是在平均分子量方面和剩余酰基含量方面彼此不同，其分子量通常从约10000至100000左右，在某些特殊场合还会有更高的值。含有约5-15%，特别是含10%左右乙酰基的低分子量化合物，最易溶于水，而分子量较高的产物和/或乙酰基含量较高的产物则难溶于水。聚乙烯醇链之间的相互作用也对溶解度有影响。由于聚合物的链在某些范围内的结晶区出现部分平行定向，而定向化的倾向越大，构成的链越规则，而抵消定向最强烈的乙酰基的比例也越低。因而在97-100%皂化度的情况下，即在3-0%乙酰化度的情况下，“结晶度”会极大增加，而另一方面，其冷水溶解度大为减小。