[其他]α干扰素类似物

说明书

本发明涉及对许多种天然α干扰素在22和23位上的ARG-ARG或ARG-LYS二元氨基酸部位的蛋白酶专一性有抗性的α干扰素类似物。

在本申请中，标准的干扰素术语于后说明。α干扰素是具有能够在免疫和结构两方面不同于其他干扰素的干扰素活性的一个族系的蛋白质。许多α干扰素的顺序都是由Pestka（Sci.Am.249（2）∶37-43，1983）给出的。关于干扰素的命名，参阅“Nature”286∶110（1980）和“ASM    News”，50∶68（1984）。

人体干扰素α-2（2A）已知有165个氨基酸组成的一级顺序，一般是由二硫桥将CYS    1与CYS    98、CYS    29和CYS    138偶联。α-2的三个等位变体如下：

（1）LYS    23，HIS    34变体（Goeddel等，Nature，287∶411-416，1980），由KG-1成髓细胞状细胞得到;

（2）ARG    23，HIS    34变体（Streuli等，Science，209∶1343-47，1980），由白细胞得到;

（3）ARG    23，ARG    34变体（Dworkin-Rastl等，Gene    21∶237-48，1983）

干扰素已经表达在酵母中，但是在该细胞环境中，其对二氨基肽酶活性的易感性并无特殊的识别（Hitzeman等，Science，219∶620，1983;Kramer等，PNAS，81∶367，1984;Dobson等，Nucl    Acids    Res.，11∶2287，1987;Tuite等，EMBO    J.，1∶603，1982;Lee等，NMucl    Acids    Res.，12∶6797，1984;Bowden等，Gene，27∶87    1984）。在异源宿主中，例如在酵母中产生人体α干扰素则是令人极其感兴趣的。因为α干扰素不是一种天然酵母产物，它并不确保对由酵母蛋白水解酶引起的反应会具有抗性。

在酵母中已经发现大量的蛋白水解酶（Archstetter等，Arch    Biochem    Biophys.，207∶445-54，1981）。酵母接合信息素α因子表达为由3种酶活性处理的前体蛋白，3种酶活性为：Lys-Arg上的类胰蛋白酶或组织蛋白酶的类B型裂解;由切割肽得到的碱基残基的羧肽酶类B型裂解;由二肽氨基肽酶A脱Glu-Ala二肽或脱Asp-Ala二肽。假定的切割Lys-Arg的肽链内切酶的结构基因（KEX2）已由Julis等分离得到（Julis等，Cell，37∶1075-89，1984）。

Bitter等（PNAS，81∶5330-34，1984年）构建一个融合基因，包括酵母α因子前导物（leader）和一个166-氨基酸α干扰素类似物（IFN-α-Con）。在α因子直接由酵母分泌而干扰素部分未发生内部裂解时，95%以上的干扰素的分泌完整无损，裂解的部位还未确定。

Horwich等（PNAS，82∶4930-33，1985）报导，线粒体蛋白质的前导物肽在整个氨基酸组分中所显示的碱性令人惊奇。在OTC酸前体的前导物肽的三个位置上，甘氨酸同时取代精氨酸导致由间质蛋白酶切割的前导物肽的断裂，即使留下8个残基，其最近1个精氨酸残基也远离蛋白水解裂解的部位。其他的研究同样也认为，远离裂解部位的氨基酸可以影响蛋白质水解作用（Hurt等，FEBS    Lett.，178∶306-10，1984;Horwich等，EMBO    J.，4∶1129-35，1985）。（（据Horwich推测，精氨酸对由间质酶识别的二级结构或三级结构是有影响的）。这些观察说明预测修饰多肽顺序对蛋白质水解反应易感性的困难。

关于干扰素在其他宿主中的表达也存在着类似问题。据Braude等报导（Biochem.&    Biophys.Comm.，89∶612，1979），主要切割色氨酰基、苯丙氨酰基和酪氨酰基羧基侧链的蛋白水解酶α胰凝乳蛋白酶可认为是一种特殊失活的干扰素。

已知α干扰素在离体ARG-ARG和ARG-LYS部位上易受胰蛋白酶裂解（美国专利4503035）。即使离体的许多胰蛋白酶裂解部位被确定，而干扰素分子在所有这些部位上的性质究竟有否受到损害仍不清楚。我们发现：22和23位上的部位是在缺乏蛋白酶酵母菌株中发现的新的二氨基肽酶的初级裂解部位，而且该部位上的裂解对生物活性有不利的影响。