[其他]免疫球蛋白结合物

说明书

免疫球蛋白是糖蛋白，即，它们是带有连在不同部位上的寡糖的蛋白质。这些寡糖上的邻二醇可以被高碘酸盐氧化产生二醛。产生的醛基可以和各种胺和肼反应，形成希夫碱和腙。例如，Willan等人在《欧洲生化学会联合会快报》（FEBS letters）80 133（1977）中氧化一个在兔的IgG的C_H2区中与第297位天门冬酰胺残基相连的寡糖。（此位置采用人体IgGl骨髓瘤蛋白Eu的编号系统）这个氧化了的物质，在纯化后，与4-氨基-2，2，6，6-四甲基-哌啶-1-烃氧基自由基反应，产生的亚胺（氨基和糖上的醛基反应）用NaBH₃CN还原产生一个自旋标记的蛋白质。Timofeev等人在《欧洲生化学会联合会快报》89 191（1978）中也用氧化了的糖蛋白单克隆抗体来制备自旋标记的物质。Murayama等人在《免疫学化学》（Immunochemistry）15 523（1978）将高碘酸盐氧化了的一个免疫球蛋白（IgG）中的寡糖与含氨基的化合物通过形成希夫碱进行标记。天门冬氨酸和辣根过氧化物酶是所用的“胺”。天门冬氨酸-希夫碱通过逆流免疫电泳可用于检测人体IgG的抗原性。O′Shannessy等人在《免疫学快报》（Immunology letters）8 273（1984）中将生物素酰肼化物和氧化了的免疫球蛋白的醛基偶连，并建议采用将荧光染料偶连到单克隆抗体的技术。

Chua等人在《生物化学和生物物理学报》（Biochimica    and    Biophysica    Acta）800    291（1984）中氧化了IgM的重链的稳定区的糖基（此区有较高的糖含量）产生醛。这些醛基和连在脂质体膜上的酰肼基团反应。该单克隆IgM抗体对于带有1-二甲氨基萘-5-磺酰基半抗原的蛋白质具有特异性。

Rothfus等人在《生物化学杂志》（J.B.C.）238    1402（1963）中用高碘酸盐氧化然后用硼氢化物还原的方法来测定人体γ-球蛋白糖肽的糖成分的一致性。

Blair等人在《免疫学方法杂志》（J.Immun.Meth.）59    129（1983），和Ghose，Blair，Kulkarni在《酶学方法》（Methods    in    Enzymology）93    280（1983）中综述了将细胞毒试剂连接到免疫球蛋白上的方法。Blair等人在130页，揭示了将细胞毒试剂连接到一个Ig上的寡糖上的可能性。但未提及氧化成醛并将细胞毒试剂与醛偶连。Ghose等人提到了将兔子的连有寡糖的抗牛血清白蛋白IgG用高碘酸盐氧化成醛基并将这些基团和乙二胺反应，然后硼氢物还原该希夫碱形成新的连在糖蛋白上寡糖部分上的氨乙基一级胺。

《欧洲专利申请公报》（EPO Application Publication）88695广泛地叙述了一些诸如上述文章所描述的方法，即从糖部分氧化衍生出来的醛基与一种化合物的肼、酰肼或氨基这些连接基团反应来形成结合物。这份申请很显然是针对连接基的，这些连接基可以和醛-抗体结合，并且连接基本身连到一种不溶性的支持剂或次级化合物上。也对抗体结合物申请专利权，这些抗体结合物包括任一通过共价的腙、亚胺或烯胺键结合在抗体糖基上的化合物。更专门的权利要求是针对肽连接基团，一种氨基酸连接基团或具有通式为W（CH₂）nQ的连接基团，其中W为C₆H₅NHCH₂-或-CH₂-，Q为氨基酸、肽、螯合剂或螯合剂衍生物。明确地公开用这种系统以进行抗体中介输送的药物包括柔红霉素、博来霉素、长春碱（VLB）、长春新碱及5-氟尿嘧啶。但未指明这些药物是如何连接的。特别是没有指明长春碱或长春新碱是如何连接的，因为这两个化合物中任何一个都不含有酰肼或氨基官能团。它强调了与Fab抗体片段的偶连。但具体公开的只限于ALKERAN（N-〔双（β-氯乙基）苯基〕丙氨酸）和抗羊红细胞的单克隆抗体的结合。没有提供在体内的数据。

进一步地，长春碱、长春新碱和其它抗肿瘤药也已经连到免疫球蛋白或其它蛋白质上。