[发明专利]链结合的方法

说明书

本发明提供一种将人类松弛素的A链和B链或者人类松弛素的A链类似物和B链类似物进行结合，以有效的产率产生具有生物活性的人类松弛素或人类松弛素类似物产物的方法。具体地说，本发明包括在PH值大于7.0，并且在使人类松弛素B链温和变性的条件下，将还原的人类松弛素A链及B链或它们的类似物发生结合的方法。通过将混和物维持在自15℃至30℃左右的温度下，并在反应过程中逐渐地暴露于空气氧中，为此该条件提供了一个形成具有生物学活性的人类松弛素或其类似物的环境。本发明也提供具有生物学活性的人类松弛素的类似物。本发明还进一步提供一种以人类松弛素或其类似物作为唯一活性剂用以引产的方法。

人类松弛素是一种卵巢肽可在分娩前使产道发生变化，从而促进分娩出生过程。Hisaw，F.L.，Pros.Soc.Exp.Biol.Med.23，661-663（1926）;Schwabe，C.etal.Biochem.Biophys.Res.Comm.75，503-570（1977）;James，R.etal;Nature267，544-546（1977）。松弛素在怀孕期女性激素中占支配地位，但在非孕期女性及男性中也检测出它的存在。Bryant-Greenwood，GD.，Endocrine    Reviews3，62-90（1982）and    Weiss，G.，Ann.Rev.Physiol.46，43-52（1984）。

取自于猪、鼠、虎鲨（Tiger    shark）角鲨及人类的松弛素的氨基酸顺序已经被建立。该激素由二条肽链组成，称为A链及B链，并以双硫键相连接，A链上有一链内双硫键因而以此方式与胰岛素A链相似。然而，松弛素与其它肽类激素，包括胰岛素在内的惊奇而又重要的区别在于它的令人注意的由于种源的不同造成化学结构的变异。例如，猪、鼠及人类松弛素有50%以上的氨基酸位置是不同的。这些区别解释了不同种的松弛素之间低的免疫交叉反应性和许多其它观察到的专一性生物活性上的区别。

DNA重组技术的应用已经使得人们能对编码人类松弛素的基因进行分离并确定其特性。Hudson，P.et    al.，Nature301，628-631（1984）and    Hudson，P.et    al.，The    EMBO    Journal    3，2333-2339（1984）.对c    DNA及基因组克隆核苷酸顺序的分析揭示了人类松弛素的结构组织包括一个信号肽，具有25个残基，随后有一个大约32至33个氨基酸的B链、一个大约有105个氨基酸的C肽及一个24氨基酸的A链。对于人类松弛素，有一个基因内区扰乱了C肽的编码区域。比胰岛素C肽长得多的松弛素C肽的生理作用及负责从A链及B链端除去C肽的酶的性质尚未弄清楚。

对于人类的松弛素而言，有两个独立的基因顺序已经被确定了。Id.在怀孕期这些基因中仅有一个基因（H2）在卵巢中获得表达，然而究竟其另一个的基因在其它组织位点被表达呢，或是它代表了一个假基因呢，这一点还不清楚。人类的这两个松弛素基因在核苷酸及氨基酸上显示了互相间的相当多的同系性，尤其是对于B肽及C肽而言。然而，也存在着一些值得注意的顺序上的歧异，特别是在A链及B链的末端氨基区域。参见图1。从H2松弛素在卵巢中被合成及得到表达的这一事实，可推测该顺序参与了孕期生理变化。最近的论文中，报导了约翰斯通等（Johnston    et    al.，）曾对合成的人类松弛素（H2）及某些人类松弛素类似物的生物学活性进行了测定。Johnston，P.D.et    al.，In    Peptides：Structure    and    Function，Proc.Ninth    American    Peptide    Symposium，Deber，C.M.，Hruby，V.I.and    Kopple，F.D.（eds.）（Pierce    Chem.Co.，1985）他们确定了对于生物学活性所必需的松弛素核心及可替代甲硫氨酸而不影响其生物活性的某些氨基酸。Id。