[其他]含有粒性的白细胞集落刺激因子的稳定药剂及其生产方法

说明书

本发明是关于一种含粒性白细胞集落刺激因子的制剂。本发明特别与一种含粒性白细胞集落刺激因子的稳定药剂有关，这种药剂可以防止活性组分（例如粒性白细胞集落刺激因子）由于装制品容器壁吸附，或结合，聚合乃至氧化而失活或丢失。

化疗是治疗多种感染疾病的一种方法，但是近来发现，化疗会引起某些严重的临床问题例如耐药菌的形成，病原菌的变化以及严重的付作用。为了避免与化疗有关的这些问题，包括例如抗生素，杀菌剂等化疗剂的应用，因此想采用一种能够活化感染菌宿主予防能力的物质，从而使前述化疗问题能全部解决。在宿主的多种予防能力中，白细胞的吞噬细菌作用在细菌感染的初期据信影响最强，因此可以设想通过促进中性白细胞的生长，分化进入成熟期可以大大加强宿主的抗感染能力。粒性白细胞集落刺激因子（G-CSF）是具有上述作用的一种十分有用物质，并且本发明的同一受让人过去曾递交过一份有关利用G-CSF作为一种抗感染药的专利（日本专利申请No23777/1985）。

如上所述，当前进行的化疗存在着多种不可避免的问题，因此正在尽力采用能够活化宿主或感染病人予防能力的药物。无可置疑，G-CSF本身具有活化宿主予防作用的能力，而且还发现，如果将其与能活化宿主予防能力的一种物质合并应用于临床的话，G-CSF则会有极大疗效。

G-CSF用量极少，G-CSF含量为0.1-500微克（最好为5-50微克）的药物服用剂量通常为每个成年人每周1-7次。但是G-CSF易于被容器例如安瓿或注射器壁所吸附。因此如果药物以这种水溶液形式注射的话，它便会被吸附于其容器例如安瓿或注射器壁上。这样一来由于吸附可能导致的损失结果使得G-CSF既不能充分表现药物的活性，也使得必须加入超过需要量的G-CSF。

此外，G-CSF不稳定，对环境因素例如温度，湿度、氧和紫外线高度敏感。由于这些因子的作用，G-CSF可发生物理或化学变化，例如结合，聚合，和氧化并且大大丧失活性。如果以十分精确的方式，极少量地服用G-CSF的话，这些现象会导致难以完全起到治疗作用。

因此需要发展一种稳定的G-CSF药剂，它能够充分防止其有效组分活性下降。这就是提供一种稳定G-CSF药剂的本发明主要目标。

本发明人为了提高含有G-CSF药剂的稳定性，进行了深入的研究，并且发现如果加入可药用的表面活性剂、糖类、蛋白质或高分子量化合物则可以有效达到这个目的。

因此，本发明含有G-CSF的稳定药剂可以被G-CSF和从药用表面活性剂、糖类、蛋白质和高分子量化合物中挑选的至少一种物质来定性。

采用例如日本专利申请No153273/1984，269455/1985，269456/1985，270838/1985，270839/1985说明书叙述的任何方法可以得到含有G-CSF的本发明药剂。例如可以通过培养患口腔癌病人瘤细胞的一种细胞株（CNCM登记号I-315或I-483）或者在一种适当的宿主细胞中（例如大肠杆菌，C127细胞或中国仓鼠卵巢细胞）通过重组DNA（是采用人G-CSF编码基固作用制备得到的）表达来制备人的G-CSF。

任何高度提纯的人G-CSF都可以作为G-CSF加至本发明的药剂中。最好是从一种产生人G-CSF的培养细胞上清液中分离人的G-CSF，并且还可以从一种含有人G-CSF活性多肽编码基因的重组载体转化过的宿主中得到一种具有人G-CSF活性的多肽或糖蛋白。

两例最好的人G-CSF例子如下：

（1）具有下列物理化学性质的人G-CSF：

ⅰ）分子量：采用十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳测定分子量大约为19，000±1，000。

ⅱ）等电点：在PI＝5.5±0.1，PI＝5.8±0.1和PI＝6.1±0.1三个等电点中至少有一个是其等电点。

ⅲ）紫外吸收：最大吸收值在280nm，最小吸收值在250nm。

ⅳ）N末端21个残基氨基酸顺序为：

H₂N-苏-脯-亮-甘-脯-丙-丝-丝-亮-脯-谷氨酰胺-丝-苯丙-亮-亮-赖-胱-亮-甘-谷氨酰胺-缬-

（2）人G-CSF或是具有人粒性白细胞刺激因子活性的一种多肽，此多肽是部分或全部以下述氨基酸序列表达的。或是一种含有所叙多肽和一个糖链部分的一种糖蛋白。

（Met）_nThr Pro Leu Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro