[其他]天然大分子的解聚

说明书

本发明涉及一个用于有控解聚天然存在的聚阴离子，尤其是针对核酸类和葡糖氨基聚糖类的新方法。特别是本方法是用于对难以被解聚的肝素和硫酸皮肤素（DS）进行有控解聚的。本发明包含从天然聚阴离子类解聚所得的产品及当这些产品是用本专利权限范围的方法得到时，含有这些产品的药物组合物。

当对实验模型或人类用口服或不经肠道的方法服药时，一些聚阴离子类的生物利用率和生物学效应取决于平均分子量（MW）的这一实验观察结果越来越引起人们的兴趣。例如，商品肝素由于当它被用作辅助因子时，对一种有效的蛋白酶禁阻剂[抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）]由于其激活性能，因而是一种众所周知的抗凝（血）剂。肝素是一种硫酸化的葡糖氨基聚糖，平均分子量为12，000D（道尔顿），相当于约20个二糖单位并且在凝血过程中，它对5种名为FⅫ、FⅪ、FⅨ、FⅩ、FⅡ的因子起禁阻作用。用解聚方法可能得到分子量低于起始肝素的碎片。最近，发现平均分子量为4000～6000D的肝素片段（较低分子量的肝素）对一些因子起禁阻作用，而对其它因子不起禁阻作用，特别对一些在血（栓）性静脉类发作中的关键因子如FX不起禁阻作用。因此可以认为低平均分子量的肝素可作为比商品肝素具有较小出血危险的有效的抗血栓形成剂。

已经观察到低平均分子量肝素的血液中的半寿期比商品肝素的长。因此，可以避开逐滴灌输和回缩现象实现一种长周期的疗法。

低平均分子量肝素的另一个优点是不会干扰血小板凝集。这是一种不希望有的影响，以前曾引起病人在肝素服药期间严重的血栓血细胞减少症。

可以描述另一个对于聚阴离子的与分子量有关的性质的例子，即与解聚有关的脱氧核糖核酸（DNA）的性质：DNA由于它的平均分子量（高于10⁶D）而不能经非肠道途径使用，但是在它被解聚后，它显示了很有意义的性质。事实上，平均分子量为25000～70000D的低聚脱氧核糖核苷酸（defibrotide）显示出抗超纤维蛋白溶解作用和免疫激发效应及预防梗塞的作用。

由于很难实行天然聚阴离子类的有控的解聚，因此，进行许多试验来研究对于这些方法的合适操作条件。

在实际操作中，有许多理由说明聚阴离子类的有控的解聚是一项困难的任务：

a）化学试制及目前所用的操作（亚硝酸、具塔-消除（bethaelimination），氧化、酸或碱水解）会改变受影响键附近或其它区域中的分子结构而这对活性来说十分关键，并会因而产生可被认为是新的化合物而不是低聚物的进一步的物质。

b）当必须把解聚停止在一个预先选定的水平上时，酶很难被控制。进一步说，有些聚阴离子类，如肝类、硫酸皮肤素和DNA不易受现有酶的影响。

c）物理的或化学-物理分馏方法，例如用分子筛、超滤或选择性沉淀方法不适宜于大规模的经济的生产。

因此，本发明的目的是通过化学反应模拟在动物组织（特别是在玻璃体尤其是软骨中）观察和研究出的导至透明质酸（HA）解聚的一些条件。在体内HA是一种在有连接作用的组织中发现的聚阴离子，被引发氧化-还原反应的一种自由基解聚。自由基（过氧化物和羟基）是由生物化学系统产生的，如在氧气和抗氧化载体如半胱氨酸、谷胱甘肽或抗坏血酸的存在下的黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶。在病理条件如局部炎症、内障、关节病及可能还有动脉粥样硬化的发作和发展中由自由基引发的天然大分子的裂解被认为是头等重要的。这种裂解是一种真正的过氧化水解（peroxydolysis），除了引起碳-氧键的水解导至HA的解聚外不会引起分子内的变化。

在一个化学实验室中模拟氧化-还原解聚的重要性是显而易见的，同样，利用自由剂消除剂使该反应迅速完全地停止在任何预定的水平上也是十分重要的。

本发明方法的特征在于在作为自由基产生系统的催化有效量的亚铁盐和作为自由基清除剂的乙醇的存在下在加气反应（aereated）条件中使用过量的过氧化氢（化学计量数的2～5倍）以及用本方法从解聚后的天然聚阴离子类得到的产物。操作的pH为中性或微酸性[pH＝4.0～7.0]。操作温度的范围（温度上限为100℃）[20℃和80℃之间]允许稳定反应速度，主要是为了在过程控制中用粘度测定法测定平均分子量。

这个方法一般可用于天然聚阴离子类的有控的化学解聚。尤其是，用这个方法可达到核酸和葡糖氨基聚糖如肝素和DS的有控解聚，而用酶的方式是难以使它们解聚的。

下面的例子揭示了这个方法而并不是限止本申请的。

例1