[其他]重组体杆状病毒载体中乙型肝炎病毒抗原的表达

说明书

本发明涉及生产人体病毒性乙型肝炎表面抗原（HBsAg）及其有关的Pre-S2蛋白质的方法。

人体乙型肝炎病毒HBV，即hepadna病毒种群之一是引起遍及世界的慢性肝病和肝癌的常见病因。该病毒基因组包括小圆形的、部分是单链的脱氧核糖核酸（DNA）物种，在病毒颗粒中与病毒DNA聚合酶相连接。DNA聚合酶的功能使病毒DNA成为双股形式，以及在感染细胞内复制病毒DNA。HBV具有肝细胞向性。人们相信这种向性的分子基础存在于病毒颗粒的表面蛋白中，在开始感染的某个阶段，与存在于受纳细胞上的细胞结构（受体）反应。细胞和人体受感染开始可被由人体抗外源病毒蛋白中产生的抗体阻滞。人们通常从急性病开始感染，常常导致长期的慢性病，包括高浓度病毒抗原（某些以所谓22毫微米非感染形式颗粒或澳大利亚病毒抗原）和42毫微米感染病毒（“Dane颗粒”）在传染期的患者血液中循环的持续性病毒感染。还在其他体液中发现病毒和病毒抗原（精液、唾液、鼻咽分泌物、经血、腹水、胆汁、泪液、乳液、脑脊髓液等），及随环境传播的病毒。人体“病原携带者”在急性感染期和慢性感染期，对疾病的流行病学都是重要的。

脂膜小球结构形式的所谓22毫微米颗粒（15～22毫微米）是作为受纳细胞活性病毒感染的副产品产生的。它主要由包埋在脂膜中的病毒（主要为HBsAg及一些Pre-S2）表面蛋白（抗原）组成。还在患者血液中发现含这些抗原的其它病毒诱发结构是丝状或杆状结构（有22毫微米宽，但有几百毫微米长）。HBsAg是用病毒遗传信息表示蛋白组分的病毒编码糖蛋白（有多至3个碳水化合物侧链的蛋白），以及用病毒所生长的细胞机器表示碳水化合物组分。像传染病毒那样，22毫微米脂类组分和其它颗粒是由病毒所生长的宿主细胞脂膜衍生的。这样，脂类和碳水化合物组分都可用细胞表示。HBsAg蛋白序列、其内在的抗原结构和碳水化合物侧链的附着位点，以及植入在脂类内的HBsAg蛋白部分都用病毒遗传序列表示。球形42毫微米传染的病毒颗粒包括DNA内部核心和结合DNA聚合酶，其包括由7毫微米脂类组成的外壳包围的核心抗原（HBcAg）和“e”抗原（HBeAg）、HBsAg和一些Pre-S2蛋白。Pre-S2是病毒和其它病毒诱发结构的微量组分，可代表对HBsAg不完全处理的蛋白质前体，因为它含有整个HBsAg序列及在HBsAg的氨基末端（“上游”）大约55个额外氨基酸。

在由BN    Fields编的“Virology”（Raven    Press）NW.1392页图5中表示的包含大约3200碱基长HBV（Robinson，1985年）的限制性内切酶位点（Bam    HI，Acc    I，等）的位置。在部分双股病毒DNA的完全（长）链中DNA具有4个开译读码（ORF），ORF包括可从互补信使核糖核酸（mRNA）序列转译成氨基酸（蛋白质）连接序列的DNA核苷酸序列。ORF-2包含表达处于同相和163个氨基酸“Pre-S”序列下游的大概25，000道尔顿HBsAg（约200个氨基酸）的序列。不能确定HBcAg和Pre-S2蛋白质是如何由ORF-2编码序列衍生而来，ORF-3编码用于相当于HBcAg（190～220个氨基酸）的主要核心蛋白。ORF-1（多半是病毒聚合酶）和ORF-4的基因产物是否相同还未肯定。

人受HBV感染通常包括熟友（常经皮肤接触）血清和含个人之间物质的血清的传输（此处为血清性肝炎的又一名称）。该疾病特别流行于发展中国家，如中国、大洋洲、南太平洋、非洲、中东及南美洲和印度的某些地区，在东南亚的一些国家中这种患病率很高（5～20%），然而这种病还发生在世界的其它地区，尤其在特殊的少数民族人群之中，即与慢性病毒携带者的密切接触、与急性乙型肝炎患者的性接触、受感染母亲的新生儿、性乱交者、共用注射针的违法吸毒者、接受血制品的血友病患者、血液渗析患者及与其接触者，以及医护人员（牙医师、护士、外科医师、临床化验室工作人员）。肝癌细胞和乙型肝炎病毒感染的结合被认为是由于从慢性抗原血症导致慢性肝炎、肝硬化，然后肝细胞瘤发展的起始病毒感染。