[其他]猪痢疾密螺旋体抗原及其应用

说明书

本发明涉及猪痢疾密螺旋体，尤其是猪痢疾密螺旋体抗原。更进一步，本发明涉及一种猪痢疾疫苗，及一种测定猪痢疾密螺旋体抗体存在的方法。

猪痢疾是普遍存在于所有养猪国家里的一种严重传染病。其症状是严重的粘液出血性腹泻，脱水和体重下降。

已发现猪痢疾是由猪痢疾密螺旋体引起的，这是一种厌氧的β-溶血性的螺旋体。

这种疾病是由于摄食了来自急性感染了猪痢疾的猪或无症状病原携带猪的含有猪痢疾密螺旋体的粪便或是农具及运输装置所扩散的排泄物而引起。

曾有过多种尝试企图提供一种抗猪痢疾密螺旋体的疫苗，这些尝试通常利用了整个密螺旋体生物。

时至今日，仍需要一种有效的抗猪痢疾密螺旋体的疫苗。

按照本发明的一个方面，提供了预防猪痢疾的一种疫苗和一种方法。

按照本发明的另一方面，提供了一种确定猪痢疾密螺旋体抗体存在的检测方法和检测盒。

按照本发明的第一个方面，提供了一种预防猪痢疾的疫苗，其至少含有一种猪痢疾密螺旋体的抗原和/或其片段。

更确切地说，用来提供疫苗的猪痢疾密螺旋体蛋白质抗原（一种或多种）具有19，000道尔顿至90，000道尔顿范围内的分子量，大多数为至少25，000道尔顿。在一个优选实例中，抗原分子量不超过65，000道尔顿。

通常，这些抗原还对从猪痢疾中恢复后的患猪的血清有免疫活性。

再具体地说，疫苗包括一种或多种猪痢疾密螺旋体抗原（或抗原的片段），其具有下述分子量：19，000道尔顿;29，000道尔顿;30，000道尔顿;31，000道尔顿;34，000道尔顿;36，000道尔顿;38，000道尔顿;39，000道尔顿;42，000道尔顿;44，000道尔顿;及60，000道尔顿。在一个优选实例中，疫苗包括上述抗原中的数种;例如36，000和60，000道尔顿抗原或其片段的组合物;29，000，31，000，34，000，38，000，39，000，42，000和44，000抗原或其片段的混合物，等等。标志这些抗原的分子量通过不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳技术得到，电泳中采用了Laemmli在Nature    227;680～85（London    1970）中描述的SDS缓冲体系，其中丙烯酰胺浓度为10～17%，双丙烯酰胺与丙烯酰胺比例为1∶29。

在一个实例中，用来制备抗猪痢疾疫苗的猪痢疾密螺旋体蛋白质抗原或多种抗原最好用这种方法得到，将猪痢疾密螺旋体生物体的表面抗原或膜抗原溶解，不要溶解或裂解该生物体。根据一特别优选的实例，通过处理未溶胞的或整个生物体来溶解猪痢疾密螺旋体抗原，虽然在某些情况下可以从溶胞的或声波处理过的生物体上获得这样的可溶表面抗原。

这种溶解作用最好采用合适的去污剂和/或一种离液序列高的试剂，其不损坏猪痢疾密螺旋体蛋白质抗原的抗原特性。去污剂或者表面活性剂可以是任何一种去污剂，包括阳离子型，非离子型和阴离子型表面活性剂。这些表面活性剂一般都是本专业领域中已知的，包括用环氧乙烷，各种肥皂碱金属盐，硫酸盐，或磺化油，各种胺类，四价盐及类似物得到的浓缩产品。优选去污剂包括十二烷基碱金属硫酸盐，十二烷酰肌氨酸;环氧乙烷的非离子型浓缩产物〔例如吐温20（Tween20）等等〕。

作为合适的离液序列高试剂的代表性例子，可以提及：尿素，氯化锂，胍，氯化氢，及其类似物。

溶解试剂，无论其是一表面活性剂还是一离液序列高试剂，优选用量为足够溶解抗原而不损坏或溶解整个生物体。通常，溶解试剂与密螺旋体生物体重量比值为0.05～1比0.1～1，优选为0.1～1比0.5～1。

溶解在这样的温度下进行，它对抗原无逆向影响，这样的温度通常介于15℃～25℃之间。类似地选择pH以保持其稳定，通常pH值不大于7.0最常用的是介于4.5～5.0。

密螺旋体的处理时间要足够长以进行抗原的溶解，通常时间为1～2小时;但在某些情况下可采用更长些或更短些的时间。

用溶解技术回收所需表面抗原的最佳条件的选择是本专业领域普通技术人员熟知的。按上面所指出的，条件和溶解试剂的选择要能够得到抗原而不溶解或打碎整个细胞。

因此，按照本发明适合用于疫苗的抗原或多种抗原的一个特性是，猪痢疾密螺旋体抗原对应于这样一种或多种抗原，后者通过用去污剂处理猪痢疾密螺旋体溶解得到，这种处理方法并不溶解或打碎密螺旋体，尽管该一种或多种抗原也可以用与上述溶解过程不同的方法得到。