[发明专利]苏芸金杆菌固体薄层保湿发酵方法

说明书

本发明涉及一种苏芸金杆菌（Bacillus    thuringiensis）固体薄层保湿发酵方法，包括培养温度，培养基厚度、塑料薄膜架空保温等几个步骤，本发明属于微生物固体发酵方法。苏芸金杆菌可从自然罹病昆虫或商品制剂中分离筛选获得，也可向国内外有关单位引种。

在本发明之前，为了较大幅度降低苏芸金杆菌制剂的生产成本，1963年美国的Mechalas首先用糠麸（半）固体培养基大规模生产苏芸金杆菌制剂。该方法所需要的设备和发酵条件较高，并且在工艺设计方面还存在两个较大的缺陷：（1）固体培养基堆放过厚;（2）发酵前半期（36小时前）通入的湿空气温度较高（30-34℃）。因而造成发酵期间料温过高，料温难以控制，杂菌污染严重。加之堆料过厚，又造成部分固体培养基通气不良等问题，从而影响了晶体毒素等杀虫活性物质的产量和质量，其产品的活孢子含量一般只有30-170亿/克。国内七十年代推行的固体发酵工艺，除了存在堆料较厚，培养温度较高、发酵料温过高、杂菌污染严重等同样毛病外，还存在培养基的湿度难以控制，保湿措施难以划一，降温措施（疏盘和定时上下对换发酵盘）劳动强度较大，发酵周期较长，霉菌污染较重等问题。因此，国内固体发酵质量较差，含菌数一般为10-100亿/克，各地产品或同一工厂各批产品的杀虫活性差异较大，质量不稳定。

本发明的目的在于避免上述现有技术中的不足之处，而提供一种能将料温自控在32℃以下的简便而省钱的规范化或标准化的固体发酵方法，该法既能有效控制杂菌严重污染，又能稳定地较好满足苏芸金杆菌在发酵过程中对温度、水份和空气三者的要求，达到发酵产品晶体大而典型，含菌数一般能稳定在100-280亿/克，杂菌污染轻或无的优质、高产、低耗的目的。

本发明的目的可以通过以下措施来达到：

1、薄层保湿发酵：

（1）、培养温度为22-29℃。

（2）、培养基铺料厚度为1.0±0.5cm。

（3）、发酵盘间距离为3-15cm。

（4）、保湿措施：发酵盘架薄层密集发酵法是在整个发酵盘架外罩以塑料薄膜保湿;夏季室内地面薄层发酵法，是在培养基上方3-50公分高处罩以塑料薄膜保湿。在发酵36-40小时后可去掉或不去掉薄膜。

（5）、发酵周期为2天。

2、选用较佳配方和配制方法：

配方一：麦麸100公斤与石灰粉1.7-2.2公斤或草木灰4-6公斤拌匀后，再与80-110公斤水拌匀。

配方二：麦麸80-90公斤，质地疏松吸水性强的植物杆粉或谷壳或珍珠岩10-20公斤，石灰粉1.7-2.2公斤或草木灰4-6公斤，上述原料拌匀后，再加90-130公斤水拌匀拌散。

配方三：麦麸50-70公斤、棉饼粉或菜饼粉或豆饼粉或花生饼粉15-35公斤，植物杆粉或谷壳10-20公斤，石灰粉1.7-2.2公斤或草木灰4-6公斤，上述原料拌匀后，再加90-130公斤水拌匀拌散。

配方四：麦麸25-35公斤，米糠25-35公斤、棉（菜、豆、花生）饼粉20-30公斤，植物杆粉或谷壳10-20公斤，石灰粉1.7-2.2公斤或草木灰4-6公斤，将上述原料拌匀后，再加90-130公斤水与之拌匀拌散。

3、培养基消毒：

维持上大汽15-60分钟，即将固体培养基蒸熟便可接种。

4、菌种及接种量：

选用优质液体发酵菌液或商业粉剂、水剂、乳剂作菌种。接种量为0.5-2%。

本发明与现有技术相比具有如下优点：