[发明专利]地龙溶栓酶的制备及其鉴定方法

权利要求书

1、一种地龙溶栓酶的制备及其作用、作用机制和性质的鉴定方法，其特征在于所说的地龙溶栓酶是从蚯蚓内体分离提取的一种成份。

2、根据权利要求1所述的制备方法，其特征是以新鲜蚯蚓为原料，经细胞碎裂、硫酸铵分段盐析、超滤膜超滤分级分离及DEAE纤维素、DEAE-Sephadex-A-25和Sephadex-G-50三种柱层析方法，可从蚯蚓体内得到聚丙烯酰胺电泳纯地龙溶栓酶。

3、根据权利要求1所述的制备方法，其特征是地龙溶栓酶的活性，是采用酪蛋白或纤维蛋白为底物，酚试剂为显色剂，721型分光光度计为测定仪器，把不同酶量与相同浓度底物作用后的样品进行光谱分析确定的。

4、根据权利要求1所述的制备方法，其特征是该酶的分子量可用SDS-聚丙烯酰胺电泳结合Sephadex-G-50柱层析进行测定，结果证明，其分子量为29，000道尔顿，该酶的热稳定性可比较各种温度下的酶的活力进行鉴定，结果证明，在25-50℃保温三小时酶的活力基本不变，其最适温度为57℃，该酶PH的影响可比较不同PH值条件下的酶活力进行鉴定，结果表明，在PH4.7-11.0范围内，酶作用稳定，而其最适PH值为8.0。

5、根据权利要求1所述的制备方法，其特征是该酶的作用与作用机制的鉴定方法是，体外以动或人血浆形成1mm³的凝块，用生理盐水洗涤数次（10次左右）然后加入溶于PH7.4缓冲液中的各种浓度的酶溶液，观察其溶解情况，其定量分析方法是，用50mg/ml药用纤维蛋白原溶液加10μ/ml凝血酶制成1mm²原纤维蛋白平板，然后将该酶溶液点于平板上，在12小时内观察溶解面积，再用与该酶作用一定时间后的纯纤维蛋白原样品，进行聚丙烯酰胺电泳和SDS聚丙烯胺电泳，观察其特异性。