[发明专利]编码脱乙酸基头孢菌素C合成酶和脱乙酰头孢菌素C合成酶的重组DNA表达载体及DNA化合物无效
申请号: | 88101644.6 | 申请日: | 1988-03-03 |
公开(公告)号: | CN1026015C | 公开(公告)日: | 1994-09-28 |
发明(设计)人: | 托马斯·多米尼克·英戈利亚;史蒂芬·怀亚特·奎纳;休伦·玛丽·萨姆森;保罗·卢瑟·史卡特德 | 申请(专利权)人: | 伊莱利利公司 |
主分类号: | C12N15/00 | 分类号: | C12N15/00;C12P19/34;C12P35/06 |
代理公司: | 中国专利代理(香港)有限公司 | 代理人: | 杨九昌 |
地址: | 美国印*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 编码 乙酸 头孢菌素 合成 乙酰 重组 dna 表达 载体 化合物 | ||
1、一种在从大肠杆菌、头孢霉菌和青霉菌组成的一组中选出的重组宿主细胞中表达脱乙酰基头孢霉素C合成酶(简称:DACS)/脱乙酸基头孢霉素C合成酶(简称:DAOCS)活性的方法,该方法包括:
(1)用一个重组体DNA表达载体转化该宿主细胞,其中包括:
(a)一个在宿主细胞中起作用的启动子和翻译的活化顺序;
和
(b)一个编码DACS/DAOCS活性的并处于由启动子表达的位置的如下DNA顺序:
5′-ATG ACT TCC AAG GTC CCC GTC TTT CGT CTC
GAC GAC CTC AAG AGC GGC AAG GTC CTC ACC GAG CTC GCC GAG GCC GTC
ACC ACC AAG GGT ATC TTC TAC TTG ACC GAG AGC GGC CTG GTC GAC GAC
GAC CAC ACC TCG GCG CGT GAG ACG TGC GTT GAC TTT TTC AAG AAC GGA
AGC GAG GAG GAG AAG AGG GCC GTG ACG CTC GCC GAC CGT AAC GCC CGC
CGC GGC TTC TCT GCC CTC GAG TGG GAG AGC ACC GCC GTC GTC ACC GAG
ACG GGC AAG TAC TCG GAC TAC TCG ACG TGC TAC TCC ATG GGC ATC GGC
GGC AAC CTG TTC CCG AAC CGG GGC TTC GAG GAC GTC TGG CAG GAC TAC
TTC GAC CGC ATG TAC GGC GCA GCC AAG GAT GTC GCG CGC GCC GTT CTC
AAC TCT GTG GGC GCC CCG CTC GCC GGG GAG GAC ATT GAT GAC TTC GTC
GAG TGC GAT CCC CTC CTC CGC CTA CGG TAC TTC CCC GAA GTG CCG GAG
GAC CGC GTC GCC GAA GAG GAA CCC CTC CGC ATG GGA CCC CAC TAC GAC
CTA TCG ACC ATC ACG CTC GTG CAC CAG ACA GCC TGC GCC AAC GGC TTC
GTG AGC CTG CAG TGC GAG GTG GAC GGA GAA TTC GTC GAC CTC CCG ACG
CTC CCC GGC GCC ATG GTC GTC TTC TGC GGC GCG GTC GGC ACC CTG GCC
ACG GGC GGC AAG GTC AAG GCG CCC AAG CAC CGG GTC AAG TCT CCC GGG
CGC GAC CAG CGC GTC GGC AGC AGC CGC ACG TCG AGC GTC TTC TTC CTG
CGG CCC GAA GCC CGA CTT CAG CTT CAA CGT GCA GCA GTC GAG GGA GTG
GGT TTC AAC GTC CGC ATG CCG TCG GAG CGC ACG ACG TTC AGG GAG TGG
CTT GGC GGG AAC TAT GTC AAC ATG CGG AGG GAT AAG CCG GCG GCA GCG
GAG GCG GCT GTC CCC GCG GCT GCC CCT GTC TCT ACC GCA GCT CCT ATA
GCC ACT-3′
其中,A是脱氧腺苷基,G是脱氧鸟苷基,C是脱氧胞苷基,T是胸苷基;以及
(2)在能够表达DACS/DAOCS活性的条件下培养在步骤(1)中转化的宿主细胞。
2、根据权利要求1的方法,其中步骤(2)所培养的重组体宿主细胞是大肠杆菌K12 JM109/pIT507、大肠杆菌K12 JM109/pIT511、产黄青霉/pPS59、产黄青霉/pPS61、产黄青霉/pPS62、顶头孢霉/pIT503、顶头孢霉/pPS52、顶头孢霉/pPS56、大肠杆菌K12/pIT507或大肠杆菌K12/pIT511。
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