[其他]编码蛋白水解酶之基因的分子克隆及表达

权利要求书

1、一个表达暗盒，其在转录方向上包含一个在芽孢杆菌宿主细胞内起作用的转录调节区和翻译起始区、一个编码高碱性蛋白水解酶的DNA序列、以及一个在所说宿主细胞内起作用的翻译和转录终止区，其中所说DNA序列的表达是处于所说起始和终止区之调节控制下的；另外至少包括一个细菌质粒的标志基因及温度敏感性复制原点。

2、根据权利要求1的表达暗盒，其中所说的蛋白水解酶是可由某嗜碱芽孢杆菌菌株PB92得到的。

3、根据权利要求1的表达暗盒，其中所说的DNA序列在核苷酸序列上与芽孢杆菌新种PB92的蛋白水解酶编码基因至少有70%同源性。

4、根据权利要求1的表达暗盒，其中所说的DNA序列编码一基本上包含下列氨基酸序列的多肽：

H₂N-A-Q-S-V-P-W-G-I-S-R-V-Q-A-P-A-A-H-N-R-G-L-T-G-S-G-V-K-V-A-V-L-D-T-G-I-S-T-H-P-D-L-N-I-R-G-G-A-S-F-V-P-G-E-P-S-T-Q-D-G-N-G-H-G-T-H-V-A-G-T-I-A-A-L-N-N-S-I-G-V-L-G-V-A-P-N-A-E-L-Y-A-V-35 K-V-L-G-A-S-G-S-G-S-V-S-S-I-A-Q-G-L-E-W-A-G-N-N-G-M-H-V-A-N-L-S-L-G-S-P-S-P-S-A-T-L-E-Q-A-V-N-S-A-T-S-R-G-V-L-V-V-A-A-S-G-N-S-G-A-G-S-I-S-Y-P-A-P-Y-A-N-A-M-A-V-G-A-T-D-Q-N-N-N-R-A-S-F-S-Q-Y-G-A-G-L-D-I-V-A-P-G-V-N-V-Q-S-T-Y-P-G-S-T-Y-A-S-L-N-G-T-S-M-A-T-P-H-V-A-G-A-A-A-L-V-K-Q-K-N-P-S-W-S-N-V-Q-I-R-N-H-L-K-N-T-A-T-S-L-G-S-T-N-L-Y-G-S-G-L-V-N-A-E-A-A-T-R-COOH.

5、包含一表达暗盒的转化的芽孢杆菌宿主细胞，所说的表达暗在转录方向上包括一个在所说宿主细胞内有功能活性的转录调节区和翻译起始区、一个编码高碱性丝氨酸蛋白酶的DNA序列以及一个在所说宿主细胞内有功能活性的翻译和转录终止调节区，其中所说DNA序列的表达是处于所说转录和翻译区之调节控制下的;另外至少包括一个细菌质粒的标志基因及温度敏感性复制原点。

6、根据权利要求5的细胞，其至少包含两个整合到所说细胞染色体中之所说DNA序列的拷贝。

7、根据权利要求5的细胞，其中所说的宿主细胞是已转化的野生型丝氨酸蛋白酶生产菌。

8、根据权利要求5的细胞，其中所说的宿主细胞是野生型丝氨酸蛋白酶生产细胞的转化的突变菌株。

9、根据权利要求8的细胞，其中所说的突变菌是丝氨酸蛋白酶生产菌。

10、根据权利要求5的细胞，其中所说的高碱性丝氨酸蛋白酶是可从芽孢杆菌新种PB92中得到的。

11、在嗜碱芽孢杆菌宿主细胞中生产丝氨酸蛋白酶的方法，所说的方法包括：

向所说的宿主细胞内引入一表达暗盒，该暗盒在转录方向上包括一个转录和翻译起始调节区、一个编码丝氨酸蛋白酶的DNA序列、一个转录和翻译终止调节区，其中所说的调节区是在所说宿主细胞内有功能活性的、以及一个用于选择已转化宿主细胞的选择标志基因;

在选择性条件下培养含有所说表达暗盒的所说转化的宿主细胞，从而得到基本上没有未转化之亲代细胞的已转化的培养物;以及

在培养基中温育所说的已转化的培养物，借以过量产生所说的丝氨酸蛋白酶。

12、根据权利要求11的方法，其中所说的宿主细胞是野生型丝氨酸蛋白酶生产菌。

13、根据权利要求11的方法，其中所说的宿主细胞是野生型丝氨酸蛋白酶生产菌的突变体。

14、根据权利要求13的方法，其中所说的突变体是丝氨酸蛋白酶非生产菌。

15、根据权利要求12的方法，其中所说的嗜碱菌株是芽孢杆菌新种PB92。