[其他]抗前S抗体检测法

说明书

本发明涉及检测人血清中抗前S抗体的方法，更具体地说，本发明涉及使用生物素-抗生物素蛋白系统、以酶免疫检测法检测针对乙型肝炎病毒（HBV）env蛋白中L蛋白或M蛋白的N末端前S区的抗体的方法。

已经知道，在患有因感染HBV引起的急性肝炎并表现有相应症状的病人血清中，在诱导HBs抗原-抗HBs抗体系统、HBc抗原-抗HBc抗体系统及HBe抗原-抗HBe抗体系统之前，就已诱导了前S抗原-抗前S抗体系统（A·Robert    Neurath，et    al.，Nature，315，154（1985）〕。已引起关注的问题有，前S抗原和抗前S抗体在完成HBV感染中所起的作用、引起乙型肝炎症状的机制、以及乙型肝炎的预防等。特别是，目前已通过在黑猩猩身上进行的实验证实，抗前S区中前S2肽的抗血清可中和HBV（A·Robert    Neurath    et    al，Vaccine，4，35（1986）〕，而且可用前S2肽疫苗预防由HBV引起的急性肝炎症状的产生〔Y·Itothet    al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，83，9174（1986）〕。另外有报道指出，抗前S区中前S1肽的抗体可阻止HBV与肝癌细胞的结合〔A·Robert    Neurathetal.，Cell，46，429（1986）〕。鉴于已认识到了抗S抗体的重要性，所以期望建立一个能特异而灵敏地检测乙型肝炎病人或接种乙型肝炎疫苗者的血清内抗前S抗体的系统。

当使用通常的酶免疫检测法（EIA）检测人血清中的抗体时，常常出现明显的非特异性反应，与用实验动物血清检测时的情况有很大差异。所以必须使用高度稀释的血清。因此，酶免疫检测法所具有的高度敏感性的优点常常得不到充分利用。这样一来，当所测定的人血清中的抗体效价很低时，则使用放射免疫测定法，其中使用了一种抗原和一种用放射性物质标记的抗体。事实上亦可使用放射免疫测定法来检测人的抗前S抗体。例如，已用抗球蛋白方法，通过检测与固相中前S肽结合的抗体来测定急性乙型肝炎病人血清中的抗前S抗体〔A·Robert Neurathet al.，Nature，315，154（1985）〕。已使用抑制法，以人血清与含有一定量前S抗原的HBs抗原溶液反应，然后使含未反应的前S抗原的HBs抗原结合到用抗前S抗体包被的小球上，并用¹²⁵I标记的抗HBs抗体检测之，从而检测人血清中的抗前S抗体〔A·Budkowska etal.，Hepatology，6，360（1986）〕。另外，就人的抗前S2区中聚合的清蛋白受体（PAR）的抗体来说，已用抑制方法检测了抗PAR抗体，其中包括使血清与固相中含PAR的HBs颗粒反应，然后使聚合的人血清清蛋白（聚HSA）结合到未反应的PAR上并用¹²⁵I标记的单克隆抗聚HSA抗体检测之〔H·Ok-amoto et al.，Hepatology，6，354（1986）〕。

可见，放射免疫测定法是一种灵敏地检测人血清中抗前S抗体的仅有的已知方法。然而，从安全性和实用性角度来看，使用放射性物质检测抗体效价受到许多限制。因此，急待发展一种使用非放射性物质的、高度灵敏的检测系统。

基于这一背景，本发明人着手建立一个不使用放射性物质，而又能高度灵敏且简便地检测人血清中抗前S抗体的系统。

已提出的不使用放射性物质检测抗体效价的高度灵敏的检测法，有酶免疫测定法（EIA）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）。但是用常规的EIA或ELISA法检测人血清中的抗前S抗体时，观察到非特异性反应。为防止出现非特异反应，必须使用稀释到100至400倍的血清。相反地，本发明人发现，当使用生物素-抗生物素蛋白系统（BAS）以EIA和ELISA法检测人血清中的抗体时，便可抑制非特异性反应，并能够很灵敏地检测抗前S抗体，从而完成了本发明。