[其他]抗前S抗体检测法

说明书

本发明涉及检测血清中抗前S抗体的方法，更具体地说，本发明涉及用放射免疫测定法检测针对存在于乙型肝炎病毒（HBV）env蛋白中L蛋白或M蛋白的N末端的前S区的抗体的方法。

已经知道，在感染了HBV并出现相应症状的急性肝炎病人的血清中，在诱导HBs抗原-抗HBs抗体系统、HBc抗原-抗HBc抗体系统及HBe抗原-抗HBe抗体系统之前，即已诱导了前S抗原-抗前S抗体系统〔A.Robert    Neurath    et    al.，Nature，315，154（1985）〕。已经对前S抗原和抗前S抗体在完成HBV感染方面所起的作用、乙型肝炎症状产生的机制，以及乙型肝炎的预防等问题引起了关注。特别是，最近已通过用黑猩猩进行的实验证实，针对前S区中前S2肽的抗血清可中和HBV〔A.Robert    Neurath    et    al.，Vaccine，4，35（1986）〕，而且前S2肽疫苗可预防HBV引起的急性肝炎症状的发生〔Y.Itoh    et    al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，83，9174（1986）〕。进一步的报导指出，抗前S区中前Sl肽的抗体可阻止HBV与肝癌细胞的结合〔A.Robert    Neurath    et    al.，Cell，46，429（1986）〕。由于认识到了抗S抗体的重要性，期望建立一种能特异而灵敏地检测乙型肝炎病人或接种了乙型肝炎疫苗者血清内抗前S抗体的系统。

用通常的酶免疫测定法（EIA）检测人血清中的抗体时，与用实验动物血清的情况有很大不同，常常观察到明显的非特异性反应。因此，放射免疫测定法（RIA）被广泛地用于检测人血清中的抗体。人抗前S抗体也靠RIA法进行检测。例如，已使用抗球蛋白方法，通过检测结合于固相中前S肽上的抗体来检测急性乙型肝炎病人血清中的抗前S抗体〔A.Robert Neurath et al.，Nature，315，154（1985）〕。已使用抑制法，使人血清与含有一定量前S抗原的HBs抗原溶液反应，然后使未反应的含前S抗原的HBs抗原结合到用抗前S抗体包被的小珠上，并用¹²⁵I标记的HBs抗体检测之，从而检测人血清中的抗前S抗体〔A.Budkowska et al.，Hepatology，6，360（1986）〕。此外，就针对前S2区中聚合的清蛋白受体（PAR）的人抗体来说，已使用抑制法，通过使血清与固相中含PAR的HBs颗粒反应，然后使聚合的人血清清蛋白（聚HSA）结合到未反应的PAR上，并用¹²⁵I标记的单克隆抗聚HSA抗体检测之，从而检测抗PAR抗体〔H.OKamoto et al.，Hepatology，6，354（1986）〕。抗球蛋白方法使结合于固相上的抗原与血清标本反应，并以RIA法检测截留于固相上的抗体，但常常出现非特异性反应。这样就必须使用稀释的人血清。所以，这种方法并不适于检测低水平抗体效价。抑制法是预先使抗原与液相中的血清标本反应，然后以RIA法检测未反应抗原的量，因为这种方法中的非特异性反应可以忽略不计，所以能计算出血清中的抗体量，但操作很复杂。可见，使用通常的RIA法检测人抗前S抗体效价有优点也有缺点。因此，期待建立一种高度特异、高度灵敏而且操作简便的RIA法。

基于这一背景，本发明人着手建立一个能够高度特异、高度灵敏而又简便地检测人血清中抗前S抗体的系统。经过努力，本发明人已找到了一个不伴有任何非特异反应，并能灵敏地检测血清标本中抗前S抗体的系统，从而完成了本发明。

本发明提供了一种检测血清标本中抗前S抗体的方法，其中将一种结合了蛋白A的载体加到含有血清标本及用¹²⁵I标记的前S肽的混合物中，然后由混合物中分离出载体并测定所分离的载体的放射性。

作为上述的前S肽，在HBV各亚型如adr、adw、ayw和ayr中，其前S区内含有一个保守区的肽都是适宜的。优选的有：前S1区中从第21至第47位含下列氨基酸序列的肽：

PLGFX¹PDHQLDPAFX²ANX³X⁴NPDWDFNP

其中X¹代表F或L，X²代表G或R，X³代表S或T，X⁴代表N、T或A;

前S1区中从第25至第42位含下列氨基酸序列的肽：