[发明专利]使用嵌合抗原的免疫诊断检测法

说明书

本发明涉及用于对感染或其他病态进行诊断和预后检测的嵌合抗原。

各种免疫诊断检测法都是基于抗原与其相应抗体之间的结合亲和力。当形成抗原-抗体复合物时，可用各种检测系统，如放射性同位素、荧光标记或酶如辣根过氧化物酶来检测复合物。

使用免疫测定技术多年来已成为标准实验室常规。所有各种检测法的基本原则都是使标记的抗原与预选的抗体结合，然后测定结合的复合物的量。近年来，使用单克隆抗体代替多克隆抗体，提高了测定的灵敏度和特异性。然而，使用单克隆抗体代替多克隆抗体，并不能完全解决特定检测的特异性或灵敏度问题。在抗体抗原复合物形成之后，仍然继续竞争分子上的特定结合位点。

许多免疫检测法依赖于结合复合物对最初用以结合到固相载体上的同一抗体的识别。因为竞争可利用的结合位点，所以在检测的两个关键点上依赖同一抗体，会进一步降低灵敏度。另外，缺乏抗体的特异性可导致出现“假阳性”，尤其是在这样一些免疫检测中，其中正在对疾病进展的各阶段进行诊断，并且，与特定疾病阶段有关的抗原决定基的识别具有重要意义。为了解决这个问题，已设计了“两位点”或“夹心”免疫测定法。在这种类型的免疫检测法中，有两个抗体结合到抗原表面上，其中一个是放射标记的或已有某些其他检测分子结合到该抗体上，而另一抗体则结合到固相载体上。这样，减少了对分子上特定结合位点的竞争。夹心法则因使用高度纯化的抗体而可进一步提高特异性。

对于某些疾病，早期诊断以及鉴定疾病的阶段可能是十分重要的，其中一个例子就是获得性免疫缺陷综合症（爱滋病）。HIV-爱滋病及相关疾病的致病因子，是还原病毒科的一个成员。存在有几种包括人类Ⅲ型嗜T淋巴细胞病毒（T-Lymphotropic    Virus，HTLV-Ⅲ）、淋巴结病病毒（LAV）和爱滋病相关还原病毒（ARV）在内的HIV的分离物。最近发现定名为2型HIV的相关还原病毒与西非的爱滋病有关（Cuyader    et    al.，Nature    326：662，1987）。

HIV基因组的分子特征表明，该病毒具有与其他还原病毒一样的整个gag-pol-env结构（Ratner    et    al.，Nature    313：277，1985;Wain-Hobson    et    al.，Cell    40：9.1985）。此外，它至少含有5个未见于较常见的还原病毒的基因：Sor、tat3、art/trs、3′orf和R。

鉴于爱滋病的严重性，早期并准确地诊断HIV感染，以及由血库中检出并除掉HIV污染的样品，是极其重要的。Callo等人在美国专利4，520，113号中公开了使用得自HTLV-Ⅲ的抗原检测血清中存在的抗HTLV-Ⅲ抗体。Montagnier等人在EP-A-138，667号中公开了使用特定的LAV抗原检测病毒感染。Papas等人在美国专利申请6，664，972号（德温特登记号85-110268/18）中公开了HTLV-Ⅰ被膜蛋白编码顺序在大肠杆菌内的表达，以及所表达的蛋白质在检测HTLV-Ⅰ感染中的应用。Crowl等人（Cell，41：979，1985）报导了HTLV-Ⅲ被膜蛋白基因（env）的某些部分在大肠杆菌内的表达，以及这些蛋白质在检测HTLV-Ⅲ感染中的应用。Casey等人（J。Virol。，55：417，1985）报导了一种gag基因产物（一种定名为p24的HTLV-Ⅲ内部结构蛋白）的纯化方法，以及该蛋白在检测HTLV-Ⅲ感染中的应用。

本领域的许多研究者从事在细菌中表达爱滋病还原病毒的各种抗原的研究。最近构建了具有HIV特定片段顺序的一些新肽，用作接触爱滋病病毒的检测试剂（Cosand，美国专利4，629，783号;Capon等人，EP-A-187041号）。Steimer等人（J。Virology，58：9，1986）描述了使用来自爱滋病还原病毒聚合酶基因（pol）的核酸内切酶区域的重组多肽，检测被感染者血清抗体的方法。

Chang在EP-A-185，444中描述了一种用含有编码env基因顺序的HTLV-ⅢcDNA的重组载体转化的细胞所表达的多肽，以及这种免疫活性多肽在检测HTLV-Ⅲ中的应用。Dowbenko等人描述了爱滋病还原病毒p24gag蛋白在大肠杆菌内的表达，及其作为诊断试剂的应用。Chrayeb等人（DNA，5：93，1986）和Steimer等人（Virology，150：283，1986）还报导了HTLV-Ⅲ核心抗原在大肠杆菌内的合成及其与人血清的免疫反应活性。