[发明专利]生产对嗜中性白细胞和嗜曙红细胞的共同抗原决定簇区域特异的单克隆抗体的方法

说明书

本发明涉及一种杂交瘤细胞系，其所产生的单克隆抗体与白细胞中的嗜中性白细胞和嗜曙红细胞都能够结合。本发明因而使得在单独一个程序中选择性地从外周血样中排除嗜中性白细胞和嗜曙红细胞成为可能。以此程序采用其它技术可得到关于所余下的白细胞即淋巴细胞，嗜碱性细胞和单核细胞的数目的大量临床数据。此外，选择性排除的嗜中性白细胞和嗜曙红细胞可供进一步分析。

在人的循环系统中外周血液的细胞成份主要包括红细胞和白细胞。白细胞功能及其临术相关性在科学界已引起很大兴趣。白细胞族包括嗜中性白细胞，单核白细胞，嗜曙红细胞，嗜碱性白细胞和淋巴细胞。许多这些细胞类型具有数种功能亚型。

嗜中性白细胞，单核白细胞，嗜曙红细胞和嗜碱性白细胞统称为吞噬细胞，因为它们在人类免疫系统中的基本功能是吞噬或消化细菌和其它微生物。这些细胞产生自人的骨髓。然而，每种吞噬细胞都具有不同的功能，成为相关，但又是各自分离的系统。尽管起源于骨髓，吞噬细胞确实进入外周血液循环。

吞噬细胞体系的一般功能是通过对一种外源物质的免疫应答实现吞噬作用。嗜中性白细胞作为消灭被抗体所包被的细菌的吞噬细胞是非常有效的，但对没有抗体包被的细菌，则不十分有效。嗜中性白细胞的主要功能是通过对病原微生物定位，然后杀死它们来防止病原微生物的入侵。

吞噬细胞体系中嗜曙红细胞发挥作用的方式与嗜中性白细胞相似。在体外检验中，这两种白细胞可响应同一抗原刺激。然而，嗜曙红细胞的应答通常在吞噬作用和杀死细菌方面不如嗜中性自细胞那样有效。最近研究表明，嗜曙红细胞在预防慢性寄生感染中很重要，此时嗜中性白细胞不是十分有效。

嗜中性白细胞是骨髓中的最常见细胞，也是外周血液中最常见的血细胞。每微升正常全血样品平均含有5×10³白细胞，其中3.075个嗜中性白细胞，150个嗜曙红细胞，25个嗜碱性白细胞，250个单核白细胞及1,500个淋巴细胞。已经认识到嗜中性白细胞在外周血液中的浓度对其正常浓度的偏离具有临床相关性。因此，嗜中性白细胞浓度增加，有时称为“嗜中性白细胞增多症”，可能是某些疾病或健康状况的标志；而外周血液中嗜中性白细胞浓度的降低，有时称为“嗜中性白细胞减少症”，则会具有另外的临床反应。在嗜曙红细胞的情况下，嗜曙红细胞在血样中的浓度若超过正常浓度，称为“嗜曙红细胞增多症”；若其在血样中浓度低于正常浓度，则称为“嗜曙红细胞减少症”。嗜曙红细胞增多症是与临床状况有关的，如变态反应状况，药物超敏反应和类白血病疾病。例如嗜曙红细胞减少症，有时是与正在进行的发炎反应有关的。

业已得到能对嗜中性白细胞特异的多种单克隆抗体。Reinherz et al，Leukocyte Typing II：Vol-ume3，Human Mycloidance HematopoieticCells，Springer-Verlag，N.Y.1986；Girardet etal，American JournalCancer，Vol.32，pp.177-183(1983)；Bernstein etal，the Journal of Immunology，Vol.128，№2，pp876-881，(February)，1982；Skubitz et al.Blood，Vol61，№1，pp.19-26，(January)，1983；Majdic etal，Blood，Vol58，№6，pp.1127-1133(December)，1981。公布在这些出版物中的单克隆抗体对于成熟和未成熟嗜中性白细胞表现出结合特异性，但尚未见到显示与嗜中性白细胞和嗜曙红细胞的唯一决定基区域的结合。

简言之，此处将叙述一种能产生相对于特定的表面蛋白质抗原的单克隆抗体的细胞系，此抗原表达在循环于人外周血液中的嗜中性白细胞和嗜曙红细胞上。已认识到此特异的单克隆抗体用于检测的其它附加优点。该单克隆抗体表现出对其它白细胞或其它的人外周血液细胞无反应性。该单克隆抗体是由一种杂交瘤细胞系产生的，其中一种融合参与者是从用人的粒细胞免疫的细胞得到的。

本发明所述单克隆抗体被命名为KC-48。它是由采用Kohler和Milstein所述的标准程序(Na-ture，256，495-497(1975))，将用人的粒细胞免疫小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合而得的杂交瘤细胞得到的。

所用的人的粒细胞是专门制备的。用静脉穿刺采集人血，并用Ficoll-Hypaque梯度密度沉淀法从粒细胞和红血细胞中分离单核细胞，然后用常规方法将红血细胞和粒细胞分离。收集粒细胞，用低渗缓冲液将残余红细胞溶胞。将粒细胞悬浮于磷酸盐缓冲盐水(PBS)中，以备免疫。