[发明专利]核酸衍生物的制备方法

说明书

本发明涉及医用核酸衍生物的一种新颖制备方法。

核酸是核糖等的糖结合在嘌呤环或者嘧啶环上，由磷酸介于它们之间，并以链相连而成。

核酸中的RNA（核糖核苷酸聚合物）是链状高分子化合物，它具有核糖作为糖，糖部分以磷酸二酯键相连结。在构成核酸的碱（例如肌苷、腺苷、胞苷、尿苷等）的嘌呤环或者嘧啶环部分，两条链以所谓互补的方式由氢键相连构成螺旋状的立体结构。由于这种含有二条链的核酸可期待具有有效的生理活性，因此迄今为止已对此进行了大量研究[Biochemical    and    Biophysical    Research    Communications    58（1974）等]。

在本说明书中，其中把作为合成双键RNA的多聚肌苷酸·多聚胞苷酸衍生物称为“poly    I·polyC”衍生物，而将其的构成单元，即多聚肌苷酸和多聚胞苷酸分别称为“poly    I”和“polyC”。

近年来，人们业已知道，各种天然或合成的双链RNA具有干扰素产生能（フィ-ルドウ。Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.58    1004（1967）。フィ-ルドウ。Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.58    2102（1967）。フィ-ルドウ。Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.61    340（1968）。タィテルウ。Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.58    1719（1967）。フィ-ルドウ。J.Gen.Physiol.56    905（1970）。デクラ-ヶウ。Methods    in    Enzymology    78.291（1981）]。

综上所述，现归纳如下：

作为干扰素，诱导物的合成核酸衍生物一览表

（Ⅰ）均聚物·均聚物复合体（以poly    Ⅰ·polyC作为基体的双链核酸聚合物）

（1）改性碱

多聚肌苷酸·多聚（5-溴代胞苷酸），多聚肌苷酸·多聚（2-硫代胞苷酸），多聚（7-脱氮杂肌苷酸）·多聚胞苷酸，多聚（7-脱氮杂肌苷酸）·多聚（5-溴代胞苷酸）。

（2）改性糖

多聚（2′-叠氮肌苷酸）·多聚胞苷酸。

（3）改性磷酸

多聚肌苷酸·多聚[胞苷基（シチジン）-5′-硫代磷酸]。

（Ⅱ）交替变换共聚物

多聚（腺苷酸-尿苷酸）。

（Ⅲ）均聚物·共聚物复合体

多聚肌苷酸·多聚（胞苷、尿苷酸）;多聚肌苷酸·多聚（胞苷酸、4-硫代尿苷酸）。

（Ⅳ）合成核酸与聚阳离子的复合体

多聚肌苷酸·多聚胞苷酸·多聚-L-赖氨酸（称为“poly    I    CLC”）。

（Ⅴ）其他

多聚肌苷酸·多聚（1-乙烯基胞苷酸）。

如上所述，近年来已发表了许多有关双键RNA，特别是以poly    I·polyC作为基体的衍生物的报告。而且，有人综述了有关含有它们的一系列核酸衍生物及其结构活性[デクラ-クウ。Texas    Reports    on    Biology    and    Medicine    41    77（1982）]。

本发明人以现有技术为基础，发现，poly    I·polyC，以及以它作为基体的各种衍生物，在以全部分子的大小分布作为沉降定值时，通过将该值调整为4S～13S（碱基数为50-10，000左右），则它们既保持了以下所述的生理活性，而其毒性又大为降低，对此本发明人提出了专利申请[特愿昭62-167433号，以及根据该申请提出的国内优先权声明]。

在上述研究的同时，为了高效率地取得上述目的物，本发明人对于下述操作进行了各种研究：

（1）将分子大小的分布统一在50-10，0000左右碱基数范围内的操作[在本说明书中，将分子大小的分布调整在一定范围内的操作称为“分级”。此外在本发明中，由于伴有低分子化现象，故分级也意味着“短链化”）;

（2）用二种单链核酸聚合物使之成双链核酸聚合物的操作（在本说明书中，称为“退火”（アニ-リング）。

表示核酸分子大小的单位常用的碱基对（或称“bp”），是由核酸的碱基数来表示其分子的大小（10bp系指具有10个碱基的双链聚合物）。在本说明书中，因为还要处理双链聚合物以外的核酸聚合物，故而使用“碱基数”的术语来代替bp（例如，所谓“10碱基数”则表示具有10个碱基的核酸聚合物）。