[发明专利]苏云金芽孢杆菌以色列亚种中编码毒素的新型DAN片段

说明书

本发明涉及编码杀虫蛋白的新型DNA片段，以及利用这些蛋白来防治昆虫，尤其是防治蚊虫。具体地说，本发明涉及编码130KD的杀蚊蛋白的DNA片段，该蛋白由苏云金芽孢杆菌以色列亚种（Bacillus    thuringiensis    subsp.israelensis）产生。另外，还对含有新型DNA片段的嵌合基因和掺入了此片段的细菌、组织、种子和植株进行了讨论。

苏云金芽孢杆菌以色列亚种是一种能形成孢子的革兰氏阳性细菌（Goldberg等，Mosquito    News    37∶355-358，1977），它在形成孢子时产生伴孢的δ-内毒素晶体（Somerville，Trends    Biochem.Sci    3∶108-110，1978;Bulla等，Crit.Rev.Microbiol.8∶147-204，1980）。该δ-内毒素对蚊和蚋的幼虫有剧毒（de    Barjac，CR    Acad.Sci.Paris，Ser    D    286∶797-800，1978，Thomas等，J.Cell    Sci.60∶181-197，1983），另外对红细胞还有溶解活性（Thomas等，J.Cell    Sci.60∶181-197，1983）。纯化的以色列亚种晶体内含物主要包含几种不同分子量的多肽，其中有MW为130KD的二聚体（即两个蛋白各自的MW为130KD）、MW为65KD和MW为27KD，以及其他小分子蛋白，见Huber等，“Pathogenesisof    Microbial    Diseases”，Davidson，E.W.编，Allanheld    Osmun，New    Jersey，209-234，1981;Thomas等，J.Cell    Sci.60∶181-197，1983;Yamamoto等，Curr.Microbiol.9∶279-284，1983）。这些多肽对以色列亚种晶体总毒性的相对贡献已引起足够的重视。

最近已有两种方法来揭示组成以色列亚种晶体的各种多肽成分的活性，有好几个研究小组报道用生化技术从晶体或晶体/孢子混合物中分离以色列亚种蛋白，见Davidson等，Curr.Microbiol.11∶171-174，1984;Thomas，Ph.D    Thesis，University    of    Cambridge，1984;Armstrong等，J.Bacteriol.161∶39-46，1985;Wu等，FEBS    Letts    190∶232-236，1985;Lee等，Biochem.Biophys.Res.Commun.126∶953-960，1985;Hurley等，Biochem.Biophys.Res.Commn.126∶961-965，1985;Cheung等，Curr.Microbiol.12∶121-126，1985;Wisser等，FEBS    Letts.30∶211-214，1985;Ibarra等，J.Bacteriol，165∶527-533，1986。利用该方法，在无其他多肽存在的条件下，对130KD二聚体、65KD和27KD多肽进行了研究。