[发明专利]培养天然牛黄的生产工艺

说明书

本生产工艺属于一种生物制药方法，它是以牛胆汁或以一定比例的牛、猪混合胆汁作原料，在特制的培养器里模拟牛胆囊结石形成的病理条件而培养出天然牛黄。

牛黄就是牛的胆囊结石，是一种名贵中药材，自古就开始入药，但由于天然牛黄产量极少，所以自古至今从来没有满足过医疗的需要，为此，从50年代起，国内一些研究单位和制药厂通过分析天然牛黄的各种成分及药理作用，研制成功了人工牛黄，并投入了生产。人工牛黄在镇静、抗惊厥、解热等方面，经药理和临床证实与天然牛黄具有相同的作用，但在心、脑血管性疾病、健康长寿以及在治疗癌症的科学研究中天然牛黄已显示出它的特色。为了获得更多的天然牛黄，国内从70年代后期又开始了牛体内培植牛黄的研究，一直到今天已有了突破性进展，但从目前搞的较好的一份报告（即山西省农科院畜牧兽医研究所武骏秀等同志搞的牛体内培植天然牛黄），最高产量17.6克，最低4克，平均8.6克，时间一年（中药材科技1983年6月第15页）一头牛一年产黄8.6克，价值688元（按每克80元计算），而一头牛一年的草料费就价值600-800元，所以经济效益不显著。在这种情况下我们发明了体外培养天然牛黄的方法，经中国医学科学院情报研究所进行国内文献检索和专家访问，截止88年5月29日没有发现这方面的报道和研究单位，经中国科技情报研究所进行国际联机检索，检索了六个数据库（九个文档）未见与本发明有关的国外文献资料。

生产工艺：

大肠杆菌的分离、鉴别与诱变→菌种→接种种子培养基→接种胆汁→离心沉降→干燥→成品。

一、菌种的分离、诱变

1、大肠杆菌分离来源：（1）从牛、猪、鸡胆汁中直接分离大肠杆菌。

（2）从牛、猪、鸡、人粪便中分离大肠杆菌。

2、诱变鉴别培养基：

（1）配方：

a、3DM：蛋白胨    2克

NaCl    0.35克

琼脂    2克

乳糖    1克

1%中性红水溶液    0.5毫升

蒸馏水    70毫升

胆汁    30毫升

b、5DM：

c、6DM：在3DM配方基础上将胆汁含量分别改为50%和60%。

（2）配制方法：

a、将蛋白胨、NaCl、琼脂加入70毫升水中加热溶解。

b、然后加入乳糖、胆汁。

c、纱布过滤。

d、调PH值7.4-7.6。

e、加1%中性红水溶液0.5毫升。

f、10磅20分钟高压灭菌。

g、冷至50℃倾注成平板。

3、菌种保藏培养基：即在6DM基础上除去中性红。

4、分离诱变方法：

胆汁（牛、猪、鸡） (4000转/分)/(离心) 沉淀物或粪便（牛、猪、鸡、人） (接种)/() 3DM (37℃24小时)/(选红色菌落) 5DM (37℃24小时)/(同时作细菌学鉴定) 6DM→菌种斜面保存。

二、接种种子培养基：

1、配方

蛋白胨    1.2克    NaCl    0.35克

牛肉膏    0.4克    乳糖    0.3克

蒸馏水    70毫升    胆汁    30毫升

2、配制方法

（1）将蛋白胨、NaCl、牛肉膏加入70ml水中加热溶解

（2）加乳糖、胆汁

（3）纱布过滤

（4）调PH值7.4-7.6

（5）10磅20分钟高压灭菌

3、接种方法：

从菌种斜面或6DM构取大肠杆菌菌落，接种种子培养基，37℃24小时即可作种子使用。

三、接种胆汁

1、胆汁来源

（1）活体牛引流胆汁

（2）屠宰后的新鲜牛胆汁

（3）60%以上牛胆汁与猪胆汁混合

（4）羊胆汁亦可

2、胆汁质量要求：

（1）取胆汁要无菌操作

（2）新鲜无变质

3、牛黄培养罐的材料要求：

培养罐内壁可用玻璃、陶瓷、乳胶等材料构成。在实验室里可用500或1000毫升的三角瓶代替。

4、添加成份为：乳糖、蔗糖、麦芽糖、牛肉膏、CaCl₂、MgSO₄，其比例随胆汁质量而变，以下为常用比例。

乳糖    0.1%    牛肉膏    0.05%

蔗糖 0.05% CaCl₂0.005%