[发明专利]抗人白细胞介素-4的单克隆抗体及产生白细胞介素-4的杂交瘤

说明书

本发明一般涉及单克隆抗体及其相关的杂交瘤，更具体地说是涉及特异于人白细胞介素-4的单克隆抗体。

人白细胞介素-4（IL-4）首先是由Yokota等人（Proc.Natl.Acad.Sci.，83∶5894-5898，1986）克隆并鉴定的。IL-4是一种作用于免疫系统许多成分的高度多向性的淋巴激活素。它具有T细胞生长因子（TCGF）活性和B细胞生长因子活性。它能够增强白细胞介素-2（IL-2）的TCGF活性和粒性白细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的集落生成活性。它诱导IgG₁和IgE的优先产生，并诱导人白细胞Ⅱ类DR抗原的表达。这些活性提示IL-4具有几种可能的治疗应用，如作为IL-2抗肿瘤治疗的增强剂，作为GM-CSF刺激的骨髓再生增强剂，或作为裸核淋巴细胞综合症的治疗剂（Touraine，Lancet，319-321（1981，2，1）;Touraine and Betuel，Human Immunology，2∶147-153（1981）;Sullivan et al.，J.Clin.Invest.，76∶75-79（1985））。

IL-4的IgE诱导活性可能对变态反应性疾病患者具有重要意义。IL-4拮抗剂的可得性可为使用具有许多有害副作用的糖皮质类固醇（特别是在长期使用的情况下）提供一种替代物（参见Goodman    and    Gillman，The    Pharmacological    Basis    of    Ther-apeutics，6th    Ed.，MacMillan    Publishing    Company，New    York，1980）。特别是，通过产生抗个体基因型抗体（例如，美国专利4，731，237）或通过模拟型筛选（如Geysen    et    al.，J.Immunol.Meth.，102∶259-274，1987;PCT专利申请WO86/00991和WO86/06487）来强烈阻断对人IL-4特异的单克隆抗体，为构建拮抗剂提供了一种方法。

任何涉及药物的治疗方法，其重要之处就在于是否能够预计和/或监测病人血液或其他体液中的药物浓度。单克隆抗体被广泛地用于这一目的（例如Springer，ed.，Hybridoma    Technology    in    the    Biosciences    and    Medicine，Plenum    Press，N.Y.，1985;美国专利4，562，003、4，486，530和4，255，329）。

在遗传改造的蛋白质如IL-4的生产中，一个主要的问题是从转化的宿主细胞和/或其培养上清液中分离所表达的蛋白质。常用的分离方法包括使粗品一次或多次通过免疫吸附柱。特异于欲纯化蛋白质的单克隆抗体是这种吸附柱的关键性组成部分。也可用这类单克隆抗体来检验由特定方法（如“Western”印迹分析法）进行纯化的程度（Burnette，Anal.Biochem.，112∶195-203，1981）。

由上述情况可以看出，通过改进现有的纯化方法，并提供监测血液、尿等体液中IL-4浓度的方法，将有利于IL-4特异性单克隆和/或多克隆抗体在医学和兽医学上的应用。

本发明提供用于检测、纯化、测定和/或抑制人IL-4的化合物和组合物。这些化合物和组合物是由产生人IL-4特异性单克隆抗体的杂交瘤中得到的。本发明的化合物和组合物包括杂交瘤本身、由杂交瘤产生的单克隆抗体、重链和轻链可变区多肽及这些抗体的其他片段，如包含轻链与重链通过天然二硫键而连接的半分子、Fab片段、F（ab）₂片段、Fv片段等。本发明还包括使用上述化合物和组合物检测、纯化和测定人IL-4浓度的方法，以及实施这些方法的试剂盒。特别是，本发明包括杂交瘤IC1·llB4.6和MP4.25D2.11及其单克隆抗体和由其衍生的产物。

本发明的组合物也可用作人IL-4的激动剂或拮抗剂。具体地说，包含拮抗性抗IL-4抗体（如MP4.25D2.11的单克隆抗体）片段的组合物可用作治疗特异反应性疾病的治疗剂。

本发明的组合物还包括自杂交瘤ICl.llB4.6和MP4.25D2.11中提取的信使RNA（mRNA）。这些mRNA可用于在细菌、酵母或其他宿主中克隆和表达ICl.llB4.6和MP4.25D2.11抗体的片段。