[发明专利]测定血中脂结合唾液酸含量的方法

说明书

本发明涉及一种测定血中，主要是人血液中类脂结合唾液酸含量的新方法。

治疗中的难题之一就是恶性疾病（下指：癌症），因为这是其是否能治愈的决定因素。在这个方面，生物化学方法的发展给出了乐观的前景。癌症研究的主线之一就是找到内源性物质，它们在癌变过程中在体液（血液，尿，脊液）中的浓度发生显著和特征地变化。这些物质叫做肿瘤标记物（下称TM）。至今已发现50多种具有TM性质的物质，但还没有一般认为的“癌试验”，在癌症检查中即还没有能给有确定并完全可信赖的答复的实验室诊断方法。导致这种情况的原因是因为对大部分TM物质而言，其测定的生物学基础，特别是肿瘤状态和TM物质的量之间的关系还未得到阐明或所得结果含混不清。另一个原因是肿瘤标记物的结构复杂，它们的分离和测定非常困难并且在大多数情况下用现存的常规实验室装备和人员难以解决，因此，它们的测定很昂贵并且难以得到较为可靠的结果。

唾液酸（N-乙酰基神经氨酸）为形成膜的糖脂和一些糖蛋白及血液基团物质的一个组份。在测定细胞膜中糖蛋白和糖脂组份的变化时发现，在肿瘤细胞及其质膜中的神经节苷脂的水平升高，因此测定神经节苷脂水平的变化可以作为一个TM试验（G.Togoaswaren：“恶性转移中的细胞膜表面糖蛋白”，AdvancesinCancer    Research，Vol.38，Academic    Press，Inc.1983，IBSN    O-12-006638-6），但迄今为止已知神经节苷脂的分析测定方法非常复杂，费时费力，因此它们不能作为常规方法而实际应用于临床实验室中。

血清中唾液酸水平或类脂结合唾液酸（LSA，唾液酸成份之一）的浓度与神经节苷脂有较好的关系。此组份可以用较为简便的分析方法检测。几个研究小组都在真实临床事例中考察并证实了LSA作为肿瘤标记物的实用性。Katopodis等[Cancer    Research    42，5270-5275（1982）]测定了850个病人取的样中的血浆LSA水平，670人临床证实患有癌症，180人无肿瘤。作者观察到患病组和无病组的LSA水平显著不同。患病组97%的样品的LSA水平高于20毫克/100毫升（平均值为26.3毫克/100毫升），而由健康人和患非肿瘤的良性病的病人中取的样的平均LSA水平为17.6毫克/100毫升。作者认为LSA水平高于20毫克/100毫升即为病理性的。作者也观察到，LSA水平的测定可用于跟踪病程，即指示治愈或加重了。

R.S.Shamberger[J.Clin.Chem.Biochem.22，647-651（1984）]测定了134无肿瘤人员（健康人和良性病病人）和160癌症患者的血浆唾液酸水平。94%的癌变病人的血浆唾液酸浓度病理性高。在这一组中，63个已发生转移的病人的唾液酸水平明显高于未转移的病人，这表明肿瘤分期和大小与血浆中唾液酸的浓度间存在关系。对10个癌症患者，作者比较43熟知的癌变胚胎抗原试验（CEA）和唾液酸测定在诊断上的实用性。只有4位病人观察到病理性高的CEA，而全部10个病人的唾液酸水平都高。作者还发现某些炎症（关节炎，牛皮癣，溃疡，等等）也伴有唾液酸升高现象。

A.M.Dnistrian等[Cl：n.Chem.27/10，1737-1739（1981）;Cancer    50，1815（1982）]考查了LSA作为乳腺癌的TM的情况。作者观察到与健康的对照组比较LSA水平显著升高。作者考查了用不同方法治疗的病人的LSA水平变化并观察到病理与LSA水平变化之间存在关连。作者还比较了从125位临床证实患癌症病人取样的血浆中的CEA和LSA水平。结果发现78%的病人的LSA水平病理性的高，而只有35%的病人的CEA水平病理性高。

从上述文献看出，LSA水平的测定可用于指示癌症的存在，估计肿瘤的分期和大小并且跟踪病理。

虽然已发展了数种测定血浆中LSA含量的方法，但只有美国专利USP4，342，567公开的方法相对简单并能在一般临床实验室条件下常规应用。按照此方法，血浆先用蒸馏水稀释，然后用氯仿和甲醇混合物萃取到脂溶组份，此后水一甲醇层用磷钨酸处理，分离得到的沉淀重新溶于水，盐酸，往水溶液中加入Cu（Ⅱ）盐和雷锁辛，血浆中的唾液酸含量用所产生的颜色反用光度分析测定。