[发明专利]毒蛇毒液多肽及基因表达

说明书

本发明涉及抑制血小板聚集作用的多肽。

总地说来，本发明涉及控制细胞粘连、抑制血纤维蛋白原和其他蛋白质与血小板结合，以及抑制血小板的聚集。血纤维蛋白原是一种存在于血浆中的糖蛋白，它参予血小板聚集和血纤维蛋白的生成。血小板是见于所有哺乳动物血液中的细胞无核片段，这些片段参予血液的凝固。已知血纤维蛋白原与受体（血小板膜糖蛋白复合物Ⅱb/Ⅲa）之间的相互作用对于正常的血小板功能是不可少的。

血管损伤时，血小板粘附在破裂的血管内皮下表面上。这种粘附的血小板随后释放出具有生物学活性的成分并导致聚集。凝集作用是因凝血酶、肾上腺素或ADP等激动剂结合于血小板膜受体上而引发的。激动剂引起的刺激作用导致潜在的血纤维蛋白原受体暴露于血小板表面上，并使血纤维蛋白原与糖蛋白Ⅱb/Ⅲa复合物相结合。

为了探讨血小板之聚集和粘连作用的机理，已使用天然产物和合成的肽进行过许多实验研究。已由各种蛇毒液中分离出血小板聚集抑制剂蛋白质。但是，在进行血小板聚集作用受这些蛋白质抑制之机理的研究中，多因缺乏结构方面的知识而受到阻碍。

最近，文献详细介绍了一种称为trigramin的毒液肽（见Huang等，J.of        Biol        Chem.，262;16157-16163，1987及1987年11月16日提交的美国专利申请121972号）。据报导，这种肽可竟争性地抑制血纤维蛋白原与血小板膜上糖蛋白Ⅱb/Ⅲa复合物的结合。据信，这种肽含有靠近COOH末端残基的Arg-Gly-Asp顺序。

Rouslahti和Pierschbacher（Science，238：491-497，1987）描述了某些粘连蛋白质，如粘连蛋白、Vitronectin，Osteopontin、胶原、thrombospondin、血纤维蛋白原及存在于细胞外基质和血液中的Von        Willebrand因子。这些蛋白质均含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽作为其细胞识别位点。该三肽可被一族结构上相关的受体（integrin）中至少一个成员识别，所说的受体是具有两个跨膜亚单位的异源二聚体蛋白质。作者认为个别蛋白质中三肽顺序的构象可能是产生识别特异性的关键。

Chersh（Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84：6471-6475，1987）介绍了一种由人内皮细胞表达的Arg-Gly-Asp定向粘连的受体，该受体在结构上与血小板上的Ⅱb/Ⅲa复合物相似，但在抗原性和功能上则有所不同。这种受体直接参予血纤维蛋白原、Von        Willebrand因子和Vitronectin在内皮细胞上的结合过程。

Pierschbacher和Rouslahti（J.of        Biol.Chem.262，36：17294-17298，1987）描述了Arg-Gly-Asp-Xaa顺序的立体化学对含有三肽顺序Arg-Gly-Asp肽之结合特异性的影响。他们还描述了（Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81：5985-5988，1987）保留连接促进活性之粘连蛋白细胞识别位点的变体。四肽Arg-Gly-Asp-Ser被描述为细胞识别的大的、粘连糖蛋白-粘连蛋白中的最小结构。美国专利4，589，881和4，614，517中介绍了某些包含-Arg-Gly-Asp--Ser一部分的肽。美国专利4，578，079中公开了一些包含-Arg-Gly-Asp-R部分的肽，其中R选自苏氨酸、半胱氨酸或其他具有如粘连蛋白样细胞粘连活性的氨基酸。

Ruggeri等（Proc，Natl.Acad.Sci.USA，88：5708-5712，1986）介绍了一系列设计长度达16个氨基，且含有抑制血纤维蛋白原与血小板结合顺序Arg-Gly-Asp-Val的合成肽。

Gold等（Circulation，77，3：670-677，1988年3月）描述了大剂量注射重组单链组织型血纤维蛋白溶酶原激活剂和抗人血小板GPⅡb/Ⅲa受体之小鼠单克隆抗体（7E3）F（ab′）₂片段对冠状动脉血栓溶解和再阻塞的影响。Gold等人发现，与重组单链组织型血纤维蛋白溶酶原激活剂一起注射抗血小板受体GPⅡb/Ⅲa之单克隆抗体7E3的F（ab′）₂片段可加速血栓溶解并防止再阻塞。