[发明专利]一种双水相系统提纯酶的方法

权利要求书

1、一种纯化酶，特别是荧光素酶的方法，该法包括用机械或化学的方法将发酵得到的细胞破碎，与水溶性聚合物聚乙二醇(PEG)和盐溶液混合，低速离心进行相分离，除去细胞破碎物沉淀再加入PEG和盐溶液，反复进行相反离4-6次，最后一次相分离用改变盐种类，盐浓度和pH值的方法使酶存在于下相水溶液中，经浓缩得到酶制剂，该方法的特征在于：

a、用一种分子量或两种分子量混合的水溶性聚合物和有机酸盐或无机酸盐组成的双水相系统，

b、通过改变pH值提高相分配系数，

c、通过改变盐的种类和浓度提高相分配系数，

d、于室温下直接从细胞破碎物中提取酶。

2、根据权利要求1的方法其特征在于双水相系统中所用的水溶性聚合物PEG可以用单一分子量的，分子量在300-2000范围内，也可以用分子量范围分别在300-2000和4000-6000的两种单一分子量的PEG的混合物。

3、根据权利要求1或2的方法，其特征在于使用两种分子量的PEG混合物时，其混合的比例分别为30-60%，混合方式可以一次混合，也可以先使用分子量较低的单一分子量的PEG，经1-2次相分离后，再加入30-60%的分子量较高的（4000-6000），形成混合的PEG一盐系统。系统中PEG总浓度为8-25%，最适浓度为12-18%。

4、根据权利要求1的方法，其特征在于所使用的盐为水溶性高的无机酸盐或有机酸盐，特别是多元酸形成的盐，如硫酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐，琥珀酸盐等，阳离子可以是Na⁺，K⁺，NH⁺₄，Mg²⁺，Zn²⁺，使用的盐浓度为7-25%，最适浓度为10-18%。

5、根据权利要求1的方法，其特征在于全部分离纯化可在室温进行。

6、根据权利要求1的方法，其特征在于本方法经4-6次连续相组成的改变，酶分离纯化的总收率为50-70%，纯化倍数为8-16倍，所得产品可用于试剂和医药。

7、根据权利要求1的方法，该方法可用于荧光素酶及其它一些酶的提取，如甲酸脱氢酶等。