[发明专利]新五肽及其制备方法

说明书

本发明涉及一个新五肽，该五肽对体内、体外试验中再生肝的DNA合成和有丝分裂速度以及对恶性肝癌细胞株的生长和DNA合成都有明显的抑制作用。

因此，这个五肽可用于治疗哺乳动物，特别是人的一些不良细胞生长的肝病如肝癌。这个肽也影响正常肝细胞，从而也可用于控制肝细胞生长的场合。

正如在WO87/00180（PCT/NO86/00041）中所叙述的，以前就知道一些五肽具有抑制细胞生长的活性。其中所说的这些五肽可抑制鳞状上皮细胞的繁殖，因此适宜治疗上皮细胞的不良生长。然而，这种活性是有选择性的，因此，已知道的一些五肽对其他器官的不良细胞生长没有同样的活性。

在Virchows        ArchB（1987）54：152-154中，Jan        Erik        Paulsen，Karl-L、Reichelt和AnneK、Petersen的文章中，以“生长抑制肝肽的纯化与鉴定，初步评论”为标题叙述了由鼠肝分离的五肽看来抑制了鼠再生肝的有丝分裂速度和DNA合成。发现部分肝切除后，DNA合成和有丝分裂速度用由鼠肝分离的肽处理后与对照相比明显降低。

除了有一个具N-末端焦谷氨酸的五肽的问题外，没有发现任何关于包括其氨基酸及其序列的叙述。大量试验后，我们发现一系列完全鉴定结构的新五肽。

根据本发明，现在提供这些新五肽的通式，

其中Z是CH₂或CO，

Y是H或OH，以及

X¹，X²和X³每一个是独立的OH或NH₂假如

X²和X³两者不都是NH₂

这些化合物可以用任何适合于制备肽的方法制备。在其制备方法后一阶段，肽将正常的做为有保护基的衍生物存在，在最后一步或几步将除去保护基（氨基，酰胺基，羟基和或羧基）。特别适合的方法就是被认为适合于低肽及其类似物制备的所谓固相法，该法制备快，产量好。用这个方法增长的肽鏈被连接于固体多聚支撑物上，並且合成起始是通过把C-末端氨基酸结合于多聚体。把最普通的氨基酸连接于聚合物支撑体在现今商业上是合用的。然后通过重复循环去保护基、洗涤和偶联将下一个氨基酸连接于结合在多聚体的氨基酸上。用这种方法以结合于多聚体的形式组成完整的肽，並且在完全组合完成时用适当试剂由多聚体上把最终产物切割下来。同时或以后也除掉保护基。

在液相肽合成中，肽鏈起始于C-末端氨基酸。除α-氨基外，全部侧鏈通常用在整个合成条件下稳定的适宜的保护基保护。α-氨基在反应中是游离的或是通过容易除掉的有机或无机盐进行半保护。

在搅拌下，向这个C-末端氨基酸（或肽）的溶液加入为增长鏈要连接的下一个氨基酸。除α-羧基外，所说的下一个氨基酸的全部反应活性侧鏈通常都用适当的保护基保护，这种保护基在全合成所使用的条件下是稳定的。α-羧基要么预先用任何适宜的方法活化，要么准备好用任何适宜的方法原处活化以便偶联到C-末端氨基酸（或肽）的游离氨基上。假如C-末端氨基酸（或肽）是用有机或无机酸形成盐的半保护，那么就需要加一当量的适宜的碱以提供游离的α-氨基。

就原地活化来说，可用任何适宜的活化方法，如DCC，EEDQ，混合酸酐，BOP，叠氮化物等。

预活化剂可以是对称的酸酐，活性酯等。

通过加某些化学药品以加速反应或抑制/阻碍外消旋以帮助偶联的羧基预活化和原处活化。这样的添加剂可以是像羟基苯并三唑，N-羟基-琥珀酰亚胺等化合物。

产生的肽可通过任何适宜的方法如液液提取或沉淀法由反应混合物中分离出来。粗产物通常不进一步纯化使用，纯化鉴定试验以TLC来进行。新肽的N-末端α-氨基去保护是通过一个试剂进行的，这个试剂能选择性地、定量地除掉暂时的N-保护基，而不影响其他（侧鏈）保护基。

这个具有游离氨基的保护的肽是增长肽鏈的C-末端部分，以把下一个氨基酸加到增长肽鏈的N-末端而重复这一完整步骤。

这个步骤被重复，直至得到整个保护的肽衍生物。

通过用能裂开所有永久性保护基的试剂处理保护的肽衍生物制备游离的肽。这种反应/试剂的例子是：

TFA对酸介质稳定的保护基

经钯/炭氢解苄保护基

适宜的用做脱除酸保护基的是HF。

这样，由C-末端-头数为五肽一部分的氨基酸单位如下：