[发明专利]一种从真菌菌丝体中提取有效成分的方法

说明书

本发明涉及一种从真菌菌丝体中提取有效成份的方法。该有效成份代号为中华808，具有促进人体免疫功能的作用，特别是对治疗各种癌症有特殊疗效。

目前采用从中草药中提取有效成份，或者加入微量化学元素制成具有促进免疫功能作用的药物或营养品的方法已有很多研究。也有从菌丝体中提取有效成份制成药物或保健饮料剂的方法，例如从香蕈的担子菌丝体中提取药效成份。

本发明的目的是培养一种毛霉属的新菌种，采用这一菌种与微量化学元素和中草药提取液加工溶和，从生长出的菌丝体中提取出一种具有促进人体免疫功能的物质-“中华808”，对治疗各种癌症、肿瘤均有特殊疗效。

本发明的特征是将载有以中草药提取液、蛋白胨、葡萄糖、化学元素、氯化钠、琼脂组成的CCD培养基的平面培养器放在土壤深处自然生长后，分离筛选出一种新的毛霉菌株，菌名为Mucor  Zona-tus  milko。经Ⅰ、Ⅱ级菌种液培养后将该毛霉菌的孢子接种于CCD培养基上，待菌丝丰满时挑出经水洗、过滤、冰冻后磨碎，可采用多种方法分离提取出黄色或白色晶体，即得中华808。

本发明的要点是：

菌种的培养、筛选：将中草药提取液20-40%，蛋白胨3-6%，葡萄糖5-10%，化学元素溶液3-6%，氯化钠3-6%，琼脂5-10%，补足蒸馏水，将pH值调至5-6.8，高压120℃灭菌30分钟，组成CCD培养基，将CCD培养基平面培养器放于深一米，宽一米，长二米的土壤坑中，坑面上盖上薄膜，薄膜上盖上五寸高的稻草，经8-12天培养，土壤中的各种微生物孢子在培养基上自然生长出，经分离筛选后，选出一株毛霉属新菌种为本发明菌种，菌名：Mucor  Zonatus  milko，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC  NO.0151。

本发明采用的菌种的菌丝体在培养基（PDA，SMA）上生长很快，分枝繁茂，形成菌落起初浅褐灰色，老后颜色变深，褐灰色;孢囊梗直立，由菌丝体直接生出，假轴状分枝，直径7.5-17.5微米，顶端生有孢子囊;孢子囊成熟时球形、褐色，直径（45.0-）65.0-82.5微米，孢囊壁易破碎消失，留有囊领，孢子囊内具有囊轴;囊轴梨形、宽卵形或近球形、25.0-55.0×22.5-47.5微米;孢囊孢子椭园形，长卵形或近球形，（3.7）5.0-7.5×3.7-6.2微米。

异宗配合，接合孢子未见。

中草药提取液的制作方法是，将龙英、三棱、麦冬、莪术、猪苓、法半夏、当归、蒲公英、金银花、茯苓、半支莲、山豆根、木香、菊花、海藻、昆布、扁豆、冬凌草、白花蛇舌草、夏枯草、仙鹤草、贝母等草药每位各20克左右，碾成细粉末状，加水1-3倍烧开，放入罐中浸泡发酵，保持温度50℃，时间3-5天，嗅到香曲味后将罐中曲药物取出，加一倍蒸馏水拌匀，用四层纱布压滤，将滤后的液体浓缩成稀糊状，高压120℃灭菌后备用。

化学元素的用量和配方是：钙、镁、铁、铜、锌、硫、磷、锰、钾、碳、钡、钒、硒和硅各用量0.3-2克，钛和锶各用量0.3克，锂0.4-0.8克，钴0.03-0.05克，碘0.4-0.7克，钼0.1-0.7克，锑0.2-0.4克，铬0.4-0.8克，将上述用量的化学元素配合在一起，在600目的筛网上加工后，溶于500毫升的双蒸馏水中，搅动20分钟，用四层纱布过滤，得清液，高压120℃灭菌30分钟后备用。

菌种液的制备：

Ⅰ级菌种液的制法：将筛选出的菌种接种在由中草药液20%，葡萄糖5%，氯化钠3%，化学元素溶液3%，蛋白胨3%，琼脂5%的斜面试管菌种培养基内，补足水份，pH值5.8-6.4，15磅/cm²灭菌30分钟，接种后在20-30℃温度下，恒温培养72-120小时后取出。

Ⅱ级菌种液的制法：将Ⅰ级菌种液接种在由中草药液40%，葡萄糖10%，氯化钠6%，化学元素6%，蛋白胨6%，琼脂10%的培养基内，补足蒸馏水，pH值5.8-6.4，15磅/cm²灭菌30分钟，接种后在20-30℃温度下，恒温培养48-64小时后取出。

毛霉菌的培养：将上述方法培养出的毛霉菌的孢子接种在CCD培养基上，可接种于斜面试管或平面培养器中，或在无菌间内大面积培养。无论以何种方式培养，均要保持充足的氧气和一定的湿度，温度保持在20-30℃，经10天左右菌丝即可长丰满，此时将菌丝挑出，用5-10%的生理盐水洗净培养基的杂质，在0℃以下用三层纱布过滤后，将干净菌丝放在冰箱或冰库中冷冻。