[发明专利]治疗剂

说明书

本发明涉及木瓜凝乳蛋白酶，改进的含有木瓜凝乳蛋白酶的药物组合物，以及治疗脊椎动物椎间的损伤的，突出的或异常的椎间盘的方法。该方法包括将一种改进的组合物溶液注入所说的椎间盘。本发明还涉及制备本发明木瓜凝乳蛋白酶的方法，和用于这些方法中的肽和亲合色谱法的基质，以及抗木瓜凝乳蛋白酶培养的单一特异抗体制剂。

木瓜凝乳蛋白酶是一种存在于巴婆（paw-paw）[番木瓜（caricapapava）]植物胶乳中的一种半胱氨酸蛋白酶。已知它可用于临床，特别是在周知的“化学核溶解（chemonucleolysis）”中治疗椎间盘的脱垂或突出或坐骨神经痛，（smith，L.（1964），J，Amer.Med.Assoc.187，137-140）。

Jansen和Balls（1941）首先尝试将木瓜凝乳蛋白酶纯化和表征它（J.Biol.chem.，137，405-417）。它们采用酸沉淀和盐析方法制备酶。近来，都使用离子交换色谱法进行纯化。例如，GB2098997（Smith        Laboratories        Inc.）和GB2156821（Simmons）都描述了采用阳离子交换树脂从其它已知的半胱氨酸蛋白酶中分离木瓜凝乳蛋白酶，这些方法都已用于工业规模生产木瓜凝乳蛋白酶。但是所得产物与Buttle和Barrett（1984.Biochem.J.223，81～88）所制备的相比较，其比活度相当低，该方法使用小规模的多步法，中间结合阳离子交换色谱步骤。这种高比活度的产物，其产率极低，而且方法不宜用于工业规模。Buttle等人（Biochem.J.（1989.7月）261，469-476）发现，这种产物由一种新近分离和表征的蛋白酶，番木瓜蛋白酶Ⅳ所污染，这种酶和木瓜凝乳蛋白酶一起从阳率子交换树脂上共洗脱。阳离子交换色谱法不能从番木瓜蛋白酶中分离木瓜凝乳蛋白酶达到这样的程度以致能用于制备木瓜凝乳蛋白酶而基本上没有番木瓜蛋白酶Ⅳ的污染。

文献中也有涉及到使用亲合色谱步骤的方法。Polgar（1981，Biochim，Biophys，Acta，658，262～269）描述了纯化木瓜凝乳蛋白酶的方法，在许多其它技术中，采用了在琼脂糖-汞化合物柱上的亲合色谱法，Dubois等人（Biol.Chem.Hoppe-Seyler（1988），369，733-740）报导了采用类似的技术由番木瓜胶乳中分离半胱氨酸蛋白酶。这种亲合色谱法是基于键合到惰性基质的汞配位体和蛋白酶的暴露的硫醇基团之间的相互作用。因此，除了木瓜凝乳蛋白酶之外的蛋白质，尤其是其它半胱氨酸蛋白酶，如番木瓜蛋白酶Ⅳ，能结合到这种柱上并接着能和木瓜凝乳蛋白酶一起共洗脱。

最近，科学论文报导了采用固定肽衍生物通过亲合色谱法来纯化特异蛋白酶，例如，人体组织蛋白酶（Rich等人，1986，Biochem.J.235，731-4）和由溶组织内阿来巴（Entamoeba        histolytica）分离组织溶解酶（Luaces和Barrett，1988，Biochem.J.250，903-909）。然而，至今这种方法还没有用于纯化木瓜凝乳蛋白酶。因此，很明显，需要一种适用于工业规模的，纯化木瓜凝乳蛋白酶的改进方法。

本发明人发现了一种新的纯化和分离高活性木瓜凝乳蛋白酶而没有污染的方法，特别是，没有番木瓜胶乳中的其它半胱氨酸蛋白酶（包括番木瓜蛋白酶Ⅳ）的污染。

本发明提供了一种木瓜凝乳蛋白酶，它基本是纯的并含有高比率的活性酶。