[发明专利]用至少一个检测参数筛选具有特定特征值群体的细胞或生物体的方法和装置

说明书

本发明总的来说涉及一种通过筛选具有特定特征值的细胞或生物体群体进行计数的方法和装置。该方法和装置具有研究、诊断或工业用途。具体地说，本发明直接提供了一种用至少一个检测参数和已结合了特定的单克隆抗体的微球，通过除去一些群体和/或一些子群体的方式，对重叠的群体或其子群体、生物体和由几部分组成的白血球或其子群体进行分析的手段。

本发明还涉及同样用筛选具有选择特征值的细胞和生物体群体进行计数的、具有研究、诊断、医疗或工业用途的一种分析仪和几种自动分析方法。具体地说，本发明所述的自动分析仪和分析方法把电子技术、光学技术和所选的生物分子（如抗体）的特异性独创性地结合起来，对细胞和生物体进行筛选并进行有针对性的计数，从而能对细胞和生物体的组成成份进行分类，并能确定细胞和生物体的表现型，以及血癌、淋巴瘤和稳定的肿瘤细胞的类型。

美国Coulter  Electrohics  Inc.of  Hialeah  Florida生产的A型库特计数器（Coulter  Counter  Moodel  A）能做为一种自动血球计数器成功地对人体外周血样进行全血球自动的常规检验。仪器中的粒子探测电子系统的工作原理已由Wallace  H.Coulter在美国专利US2656508（1953年10月20日批准）中披露。完全根据这种库特电子检测原理工作的粒子分析仪中避免使用昂贵而又容易出问题的光学敏感元件或激光器件。

现已对这种库特检测原理进行完善和发展，并推出许多更为精益求精的仪器，如S型库特计数器（COULTER  COUNTER  Moodel  S）。这些仪器借助专门的计算机程序能检测全血球参数，进行细胞的绝对计数，能进行血小板计数及其形态测定，能进行红血球（RBC）形态测定，能解释正常血样和反常血样。

库特粒子电子检测原理采用了一个小孔直流馈电的孔检测电路（aperture  sensing  circuit）。该类粒子传感器结构简单，特别结实可靠，受到美国乃至全世界众多采用COULTER  COUNTER类自动分析仪的临床实验室的称赞。1970年批准的Wallace  Coulter和Walter  Hogg的美国专利US3502974对这种基本的孔检测电路又做了进一步改进。除采用这种标准的直流孔供电方式外，为检测分类用的其它参数，还施加了一个高频孔径电流。高频孔径电流产生了一个反映血球的内部电导及体积的信号。由直流孔径电路同时产生的信号是一个常见的直流放大信号，该信号主要指示了细胞的体积。用一高速除法电路实现射频信号幅度和直流脉冲幅度的除法运算，所得的商通常称为“浑浊度”，它反映了细胞体积及内阻。在1970年批准的Wallace  Coulter和Walter  Hogg的美国专利US3502973中对该原理进行了进一步的描述。这个参数可用于细胞分类系统。一个单独的孔或者由两个相互独立的孔构成的一对孔都能用于这种用途。

在信号对产生时，对比信号对的数值，就可以对不同群体进行分类。该信号对中一个是粒子体积测量值，另一个是细胞内电导或浑浊度测量值。通常用称为散布曲线或散点图的二维曲线图来表示这类数据对。纽约州纽约市的John  Wiley  &  Sons公司1979年出版的由Melamel  Melaney和Medelsohn所编的“血球流动计数和分类”（Flow  Cylometry  and  Sorting）一书中第371页对这种图进行了详细的阐述。

图5A示意了一正常血样的数值散布图。图中每个点代表了一个单独的细胞。基线以上的高度值表示细胞的相对体积，图中点离开垂直基线向右的距离表示相对浑浊度。正常白血球（WBC）散布图（已将血样中的红血球去除）中有三群体，表明可以根据这些细胞的大小和内部构造的内在差别将这些细胞分为三个不同的群体。如果需要的话，可以用适当的电路对这几个群体的每一个计数。可以根据这些内在差别对细胞进行分类。

以前的库特粒子电子检测原理的专利申请都是先进行红血球计数，然后再进红血球其它参数的复杂的测定工作，然后从整个外周血样中除去红血球，只要除去红血球的过程不显著影响待测的剩余白血球的群体性质，就可以进行白血球群体测定了。为此而研制了许多红血球溶解剂。虽然这些试剂行之有效，用途广泛，但用于下面的白血球测定时仍不尽令人满意。