[发明专利]一种细菌灭幼蚊剂的双菌协同发酵法

权利要求书

1、一种细菌灭幼蚊剂的双菌协同发酵法其特征在于所述的双菌协同发酵法是利用H₁₄和B.S两种菌混合共生的相容性，把H₁₄和B.S放入同一只发酵罐中，采用深层发酵的“二级发酵工艺”或“一级发酵工艺”制得一种新的灭幼蚊剂，该灭幼蚊剂不但同时含H₁₄和B.S两种菌，而且在使用效果上与H₁₄或B.S单菌灭幼蚊剂都有实质性差别，上述两种发酵工艺包括：

(一)二级发酵工艺：

(1)菌种斜面，(2)摇瓶菌种，(3)种子罐，(4)发酵罐，(5)产品后处理(第一步浓缩，第二步防腐处理)，(6)产品质量检验。

(二)一级发酵工艺：

(1)菌种斜面，(2)发酵罐，(3)产品后处理(第一步浓缩，第二步防腐处理)及产品质量检验。

2、按照权利要求1所述的双菌协同发酵法中（一）二级发酵工艺的（1）菌种斜面其特征在于“菌种斜面”的

（1）斜面培养基配方：牛肉膏0.5%;蛋白胨1.0%;琼脂2.0-2.5%，其余为花生饼粕粉（或豆饼粕粉，或菜子饼粉，或棉子饼粉）水浸出液。

（2）菌种斜面培养条件及方法：将H₁₄和B.S两种菌分别单独接种于两个装有已灭菌，PH值为7-9的“斜面培养基”上，接完种将斜面培养基置于培养箱内，在26-30℃下培养24-72小时，肉眼观察菌苔生长丰富，性状良好，无噬菌斑，检验无杂菌，H₁₄芽孢和伴孢晶体分离，其比例为1∶1或晶体更多些;B.S大部分形成孢子囊即可。

3、按照权利要求1所述的双菌协同发酵法中（一）二级发酵工艺的（2）摇瓶菌种其特征在于“摇瓶菌种”的

（1）摇瓶培养基配方：

牛肉膏0.5%;蛋白胨1.0%;其余为花生饼粕粉的水浸出液（用棉子饼粉、豆饼粉、菜子饼粉均可）。

（2）摇瓶菌种培养条件及方法：

在≤30℃条件下，将已培养好的“菌种斜面”接种于装有己灭菌，PH值7-9“摇瓶培养基的”三角瓶中，在26-30℃下将接好种的三角瓶置于摇床上培养24-48小时，检验菌种生长茂盛，无杂菌即可。

4、按照权利要求1所述的双菌协同发酵法中（一）二级发酵工艺的（3）种子罐其特征在于“种子罐”的

（1）种子罐培养基配方：

KH₂PO₄0.1%;NaCl 0.2%; MgSO₄0.03%;甘油聚醚消沫剂0.1%，其余为花生饼粕粉（豆饼粉，菜子饼粕，棉子饼粉亦可）水浸出液。

（2）种子罐发酵条件及方法：

将上述摇瓶菌种H₁₄和B.S分别按种子罐培养基的0.1%～1%相同量引种到两支体积、结构相同的装有己灭菌，PH值为7-9（7.8～8.7为最佳）“种子罐培养基”的种子罐中;在罐温26-30℃（28℃为最佳），罐压0.3-0.5公斤/厘米²，通气量0.8-1升/升/分，搅拌转速240转/分，常开，培养时间≤8小时;经检验，当菌种进入生长对数期，无杂菌，每视野量8-10个菌时即可。

5、按照权利要求1所述的双菌协同发酵法中（一）二级发酵工艺的（4）发酵罐，其特征在于“发酵罐”的

（1）发酵罐培养基配方：与“种子罐培养基配方”相同。

（2）发酵罐发酵条件及方法：

先将上述种子罐已培养好的H₁₄菌液按发酵罐液量的0.1-1.0%压入装有已灭菌，PH值为7-9发酵罐培养基的发酵罐中;在罐压0.3-0.5公斤/厘米²，罐温26℃-30℃（28℃为最佳），通气量0.8-1升/升/分，搅拌转速240转/分，发酵时间在≤8小时内（以8小时为最佳），再将种子罐已培养好的另一种B.S菌压入本发酵罐中，使H₁₄与B.S两种菌在同一发酵罐中进行协同发酵和共同生长，当发酵时间（以H₁₄菌发酵时间计）达12小时时，发酵罐的通气量增大至1-1.5升/升/分，发酵总时间为24-48小时（以H₁₄菌发酵时间计），且两菌孢子形成率达80%以上时，即可收获。