[发明专利]人成视网膜细胞瘤基因产物磷酸化的细胞周期依赖性调节

说明书

本发明涉及抑制细胞增殖方面，此外，本发明还涉及癌症和增殖细胞疾病的预防和治疗。

增殖活跃的细胞失去生长因子就停滞在细胞周期的Go期。相反，当供给合适的生长因子时，静止细胞被诱导增殖。静止细胞暴露于生长刺激物中，引起很多特异基团的表达及其产物的量和质上的变化。例如，将静止细胞暴露于血小板诱导生长因子（PDGF）（Wahl，et.al.，Mol.Cell.Biol.9：2934（1989）;Meisenhelder，et.al.，Cell，57：1109（1989））或表皮生长因子（Wahl  et.al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA  86：1568（1989）;Margolis，et.al.，Cell  57：1101（1989）），引起它们的受体酪氨酸激酶活性的激活，然后可直接使磷脂酶磷酸化，这又可依次引起其他生化反应，如细胞内钙离子的升高，磷酸肌醇的水解，蛋白磷酸化的减缓，以及新mRNA合成的诱导[见Deuel，Annu，Rev.Cell  Biol.3：443（1989）]。因为这些在转录上被激活的基因中有些是原始致癌基因，所以控制细胞增殖的研究主要着重于在增殖反应早期其表达被激活的相似基因的分离和赋予特征（Cochran，et，al.，Science  226：1080（1984）;Thompson，et，al.，Nature  319：374（1986）;Lau  &  Nathans，Proc.Natl.Acad.Sci.（U.S.A.）84：1182（1987）;Ryter，Proc.Natl，Acad.Sci（U.S.A.）85：1487（1988））。一些特别在静止期表达的基因也被分离了出来（Schneider，et，al.，Cell  14：787（1988）;Bedard，et.al.，Simmons  &  Erikson，Mol.Cell.Biol.9：1371（1989））。当细胞暴露于生长刺激物中时，这些基因的表达受到抑制。因此，特异基因的向下调节通过去除细胞增殖的障碍物，对于促有丝分裂反应也可能是重要的。

人成视网膜细胞瘤基因（RB1）是一类基因的原型，其等位基因的同时失活被认为是新生物生长所必需的。RB1的分离在分子水平上证实了成视网膜细胞瘤和临床有关的肿瘤如骨肉瘤有基因缺失（Friend et.al.，Nature 323：643（1986）;Fung et.al.，Science 236：1657（1987）;Lee et.al.，Science 235：1394（1987））。此外，用RB1 cDNA探针和抗其基因产物（Rb）的抗体进行的分折也揭示了很多成人肿瘤如小细胞肺癌（Harbour et.al.，Science 241：353（1988）;Yokota et.al.，Oncogene 3：471（1988））和乳房肿瘤（T'Ang，et.al.，Science 242：263（1988）有RB1的缺失。RB1在控制新生物生长上的重要功能受这样的事实支持，即Rb与腺病毒EIA（Whyte et.al.，Nature 334：124（1988））、猿猴病毒40（SV40）大T抗原（Decaprio et.al.，Cell 54：275（1988）的变异蛋白和人乳头状瘤病毒的E₇蛋白（Dyson，et.al.，Science 243：934（1989）形成物理性缔合。

图1A表示RB和RB1-AB20的免疫沉淀反应，用SDS-PAGE法。

图1B表示用流动细胞计数法分析RB的稳定状态。

图1C表示在脉冲追踪实验中Rb降解的SDS-PAGE分析。

图2表示在不同生长条件下细胞中Rb的磷酸化作用。

图3表示被各种化学制剂诱导分化的HL-60A细胞的Rb磷酸化作用。

RB1的失活伴随着肿瘤发生。本发明的一个目的在于利用Rb的功能限制细胞增殖。

本发明的另一个目的是提供在含Rb蛋白的细胞上抑制细胞增殖的一种方法，包括对增殖细胞给予一种能抑制所述Rb磷酸化作用的化合物。

本发明的另一个目的是提供一种在含Rb蛋白的细胞上抑制细胞增殖的方法，其中所述化合物选自包含视黄酸、二甲基亚砜、丁酸和TGF-B的一组化合物。

本发明的另一个目的是提供一种在含Rb蛋白的细胞上阻止细胞增殖的方法，包括对增殖细胞给予一种能抑制所述Rb磷酸化的化合物。