[发明专利]多步免疫测定方法及其自动测量装置

说明书

本发明涉及一种连续多步免疫测定若干生物样品中至少一种生物物质的自动测定仪器和方法。

本发明尤其涉及(但不受限)对同一样品同时测定其配位体、抗配位体、半抗原或在待分析的生物液体中可能存在的任何其他生物物质。

用免疫方法确定生物液体中生物物质的存在或配位体浓度的方法目前已熟知，它们基于待测物质与一种或多种抗体之间生成复合物，抗体尤其是可用酶标记的复合物的一种组成部分，在分离抗原或复合标记的抗体之后能定量检测和/或分析其抗原或未复合标记的抗体。

RIA与ELISA方法的原理同样是熟知的。尤其是，ELISA法(Enzyme-Liniced immunusorbent assay)是一种灵敏度很高、测定抗体的免疫酶法，例如，它在于使用一种免疫吸附复合物，这种复合物主要由一种定位在固体载体上抗原组成，俘获待测物的生物介质(如血清)中含有的特异性抗体，这样得到的免疫—复合物可用一种酶标记的抗-粒种抗体，此后加入一种特异性的酶作用底物，因酶的降解作用而出现一种带颜色的产物来测定，其颜色的强度与进行反应的酶的量成正比，与所检测生物介质中的抗体量成正比；其光的强度可用肉眼判断或用任何适宜的方法，尤其是测光法测定。

在利用多相的上述免疫方法中，作为免疫反应载体的这种固相的性质是特别重要的，因为它决定了测量的灵敏度。

ELISA试验所提出的载体，尤其是由戊二醛活化的聚丙烯酰胺颗粒(AVRAMEAS和TERNYNCK，Immunochemistry，1969，6，PP53-65)；由溴化氰活化的纤维素颗粒，其上由共价键定位抗体(ENGVALL和PERL-MANN，Immunochemistry，1971，8，PP871-874)；聚苯乙烯管，其表面上通过单一的物理吸附定位抗原(ENGVALL和PERLMANN，J.Immum.1972，160，PP129-136)；由溴化氰活化的纸盘，其上定位一种抗体或一种抗原(BRIGHTON和COLL.Scand.1974，29，PP166-174)。然而，实际上最通用的载体是塑料表面，它是聚苯乙烯或PVC的微型板、有呈U或V形的96个平底坑，或者有8个坑的棒。

另外一种载体，由曾描述过的磁球构成，可以使实施方法实现自动化。

尤其可以注意到，欧洲专利38730中描述的磁球，RHONE POULENCSPECIALITES CHEMIQUES描述的磁性聚合物胶乳，欧洲专利125995(AD-VANCED MAGNETICS INC)中描述的磁球，法国专利FR2262805与FR2454098(CORNING GLASS WORKS)描述的磁球，或欧洲专利申请(SE-RONDDIAGNOSRTICSPARTNERS)105714、190006、238353、249357中描述的磁球。

上述文献中描述的各种磁球同样适用于诸如ELISA或RIA的免疫测量。

无论是RIA法还是ELISA法都可以多种方式使用；

——间接法是测量抗体最简单的方法。其抗原定位在微型板上(在蛋白质存在的情况下以阻断未占据的位置)。加入待测量的血清，并由加入用适宜方法标记的抗-Ig抗体，尤其与一种酶连结的抗-Ig抗体，并在加入酶作用底物后用分光光度法定量测量而探测出定位的抗体。

——一种竞争技术可用于测量抗原。正如上述技术那样，其抗原始终定位在这些微型板上。加入抗原和少量抗体的混合物。定位在该微型板上抗体的量比被中和的抗原分子少得多，不再有抗体分子。

——夹层或双位点方法可用于测量抗原或抗体。为了测量抗原，由抗体复盖微型板，加入抗原，然后使用以适当方式标记特异性抗体，尤其是与一种酶联结的特异性抗体，并加酶作用底物显色。然而本技术只适合二价抗原或具有多个决定子的抗原。为了测量抗体，正好相反，抗原复盖微型板，再相继加入待测量的抗体和用酶标记的抗原。

然而，所述方法实施起来完全不是自动化的，因为它们不能目动测量多个样品中至少一种物质。事实上，使用这些不同方法只能参数与参数类型相同(竞争或夹层或免疫俘获)成批测量，或者连续回流、或者断续回流测量，其速度较慢。

当然，特别是在药物分析试验室配备随机存取的多参数测量、运行非常快速且价格便宜的自动化装置，是人们理想中的设备。

随机存取的多参数测量，尤其是对生物样品的多参数测量，可以测量20个不同参数，而对后一种样品只能测量例如2个参数。