[发明专利]改进的脑膜炎双球菌多糖结合菌苗

说明书

本发明涉及化学改性的脑膜炎双球菌(Neisseria meningitidis)B血清群多糖。本发明也提供多种菌苗，在该苗中相应改性的多糖与蛋白质载体结合。

由脑膜炎双球菌B血清群和大肠杆菌(E.coli))K1引起的脑膜炎仍是世界上主要的健康问题。B型脑膜炎发生于地方性和流行性，并约占全部记录的脑膜炎双球菌脑膜炎病例的一半，而K1-阳性大肠杆菌是新生儿脑膜炎的主要起因。现在尚无商业性的抗由脑膜炎双球菌B血清群和大肠杆菌K1引起的疾病菌苗。在很大程度上这是由于这样一个事实，即脑膜炎双球菌B血清群多糖(GBMP)在人体中仅产生很微弱的免疫。近来有某些报导基于GBMP与外膜蛋白质形成复合体的选择菌苗，然而迄今还没有这些菌苗对人体有效的明显证据。

近来，发展了基于含成化学改性的(N-丙酰化的)B血清群多糖-蛋白质(N-Pr-GBMP-蛋白质)结合物菌苗的新概念。该菌苗在鼠中诱导IgG抗体的高滴度。该抗体不仅是预防性的，而且同未改性的GBMP(即-N-乙酰基-GBMP)交叉反应。这一概念已公开在美国专利NO.4727136中并要求保护(1988年2月23日授权与Harold J.Jennings等人)。

已经指出，例如在美国专利NO.4727136中公开的增加交叉反应抗体的菌苗只是在牺牲极限免疫耐受性时才是有成效的。这种假设被一般抗原决定簇证实是含理的，该抗原决定簇由天然N-Ac-GBMP和人及动物组织中的α-(2-8)-连接的唾液酸残基(最少需要10个残基)链组成(Jennings，Contrib.Microbiol.Immunol.Basel，Karger，1989，Vol.10，151-165)。这些聚唾液基(polysialosyl)链的功能作为制备抗原并且大部分在胚胎中性细胞粘连方面与胚胎阶段有关(Finne et al，Biochem.Biophys.Res.Commun.，1983，112，482)。在出生后的成长过程中，这种抗原是向下降调节(Friedlander etal，J.Cell Biol.1985，101，412)，但它在成年人在患病肌肉再生期间(Cashman at el，Ann.Neuron.，1987，21，481)在肿瘤细胞(Rothet al，Proc.Natl.Acad.Sci.，1988，85，299)以及在天然K细胞(NK)和CD3⁺T细胞(Husmann et al，Eur.J.Immunol.，1989，19，1761)中表现出来。尽管至今对这些胎儿抗原的极限碉受性尚未形成结论，但通常认为，由于这种交叉反应，一些许可机构对N-Pr-GBMP-蛋白质结合物要进行仔细研究，因为在它被批准商品出售之前需做证明该菌苗安全性的复杂实验，结果导致相当大的花费并延误时间。

本发明的一个目的是开发一种具有免疫特性的菌苗，其免疫特性强于N-Pr-GRMP蛋白质。本发明的另一目的是提供一种显示与GBMP交叉反应实质降低的菌苗。

本发明的一个方面，是提供具有唾液酸残基N-乙酰基(C₂)被C₄-C₈酰基取代的改性脑膜炎双球菌B血清群多糖。

本发明的另一方面，是提供一种抗原结合物，该结合物含有结合到合适的免疫蛋白质上的N-C₄-C₈酰基多糖，并具有增强的致免疫性及诱导实质上降低的交叉反应抗体。

本发明的又一方面，是提供一种菌苗，该菌苗含有与合适载体或稀释剂结合的N-C₄-C₈酰基多糖-蛋白质结合物。本发明的菌苗也可含有对人体适用的治疗有效量的辅助剂，例如磷酸铝或氢氧化铝。

本发明的再一方面，是提供一种哺乳动物抗脑膜炎双球菌和大肠杆菌K1感染的免疫方法，该方法包括将免疫有效量的本发明菌苗通过肠胃外给药于受到这种感染的哺乳动物，包括人。该菌苗的典型给药量为每千克体重约1-50微克，例如每千克体重5-25微克。

另一方面，本发明提供了能够预防由脑膜炎双球菌B血清群和大肠杆菌K1引起的脑膜炎的γ-球蛋白馏分。该γ-球蛋白馏分通过用本发明的菌苗免疫哺乳动物而产生。然后将该γ-球蛋白馏分给药于一个个体，以提供预防或治疗由上述微生物正在引起的感染。由此可认为，本发明的免疫菌苗结合物由于它的良好致免疫性及最低诱导GBMP交叉反应抗体.，它可作为治疗抗血清的来源。本发明的结合物也可用于增加单克隆抗体，并有可能用于抗遗传型抗体。