[发明专利]生产腈水化酶的方法

说明书

本发明涉及由玫瑰色红球菌J-1(Rhodococcus rhodochrous J-1)产生的并编码具有将腈水化为酰胺的腈水化酶活性的多肽的DNA片段。本发明还涉及含该DNA片段的重组DNA和用该重组DNA转化的转化株。本发明进一步涉及用该转化株生产腈水化酶和用该腈水化酶生产酰胺的方法。

公众已知腈水化酶是一种将腈水化为酰胺的酶。产生腈水化酶的微生物包括属于芽孢杆菌属(Bacillus)、杆菌属(Bacteridium)、微球菌属(Micrococcns)和短杆菌属(Brcvibactcrium)(参阅JP-B-62-21517，1989，USP No.4001081)、棒状杆菌属(Corynebacterium)和诺卡氏菌属(Nocardia)(参阅JB-B-56-17918/1989，USP No.4248968)、假单胞菌属(Pseudomonax)(参阅JP-B-59-37951/1984，USP No.4637982)、红球菌属(Rhodococcus)、节细菌属(Arthrobacter)和微杆菌属(Microbacterium)、(参阅JP-A-61-162193/1986，EP-A-0188316)和玫瑰色红球菌(Rhodococcus rhodochrous)(参阅JP-A-2-470/1990，EP-A-0307926)。

腈水化酶已经用于将腈水化为酰胺。在本发明中，根据重组DNA技术，采用遗传工程方法使微生物含有编码腈水化酶的更多拷贝重组DNA。与常规所用的微生物相比，重组体产生显著高水平的腈水化酶。

本发明人先前公开了由Rhodococcus spN-774(FERM-BP-1936)(CCTCC No：M91004)产生的DNA片段，该片段编码具有腈水化酶活性的多肽(JP-A-2-119778/1988)。

可是本发明人由玫瑰色红球菌J-1产生的DNA片段用于产生腈水化酶。我们分离到编码腈水化酶的基因，并将该基因插入到适当的质粒载体中，再用该重组质粒转化适当的寄主，从而成功地获得产生对芳腈具有高活性的腈水化酶的转化株。

本发明涉及如下几个方面。

(1)编码具有腈水化酶活性的多肽的DNA^(H)片段，所述多肽含有下列氨基酸顺序的α^(H)-和β^(H)-亚单位：

α^(H)-亚单位：

                  5             10             15

    MetSerGluHisValAsnLysTyrThrGluTyrGluAlaArgThr

                 20             25             30

    LysAlaIleGluThrLeuLeuTyrGluArgGlyLeuIleThrPro

                 35             40             45

    AlaAlaValAspArgValValSerTyrTyrGluAsnGluIleGly

                 50             55             60

    ProMetGlyGlyAlaLysValValAlaLysSerTrpValAspPro

                 65             70             75

    GluTyrArgLysTrpLeuGluGluAspAlaThrAlaAlaMetAla

                 80             85             90

    SerLeuGlyTyrAlaGlyGluGlnAlaHisGlnIleSerAlaVal

                 95            100            105

    PheAsnAspSerGlnThrHisHisValValValCysThrLeuCys

                110            115            120

    SerCysTyrProTrpProValLeuGlyLeuProProAlaTrpTyr