[发明专利]用于治疗肿瘤病的抗体结合物的制备方法

说明书

本发明一般涉及免疫结合物领域，更具体地说是涉及免疫结合物在治疗癌症中的用途。本发明也涉及用单克隆抗体(MoAbs)和细胞毒素部分的结合物来治疗黑素瘤，这些细胞毒素部分是例如gelonin、核糖体抑制蛋白质、其它从植物中派出来的细胞毒素部分或是细胞毒素的或抑制细胞生长的生物应答修饰因子。

由于在治疗肿瘤的足够反应要视肿瘤内药物浓度的释放和保持而定，故癌症治疗的精确定向必然是相当关键的。定位疗法是采用单克隆抗体作为特定治疗剂载体的一些研究者的目标。

癌症是西方社会中死亡率和发病率的一个主导原因。有许多类型的癌症，并各具特征。但是，癌症至少有一个共同特征，即细胞生长调节过程中存有缺陷。

黑素瘤，最致命的皮肤癌，是侵袭男女的高转移性的疾病，在诊断后的五年中几乎所有病人都难免一死。外科手术切除去局部恶性肿瘤仅在发病初期还未扩散时才有效。一旦疾病扩散后，外科手术必须附以其它一般方法作为补充以根除病变的细胞或恶性肿瘤细胞。大多数通常使用的补充疗法诸如放射疗法或化疗，它们非局限于对肿瘤细胞的作用，虽然相对而言对恶性肿瘤细胞的杀灭作用较大，但常常会在一定程度上损伤正常细胞。

许多肿瘤表达一些正常细胞表达极微弱或根本不表达的抗原或抗原决定簇。一些肿瘤细胞表达胚胎类型细胞所表达的抗原，而这种抗原不被成熟动物的正常细胞所表达。这些异常表达的抗原被称为肿瘤相关抗原。这些抗原的专一性在于尽管特定的抗原可能被多于一种肿瘤所表达，但它通常是被表达该抗原的特定肿瘤的所有或大多数细胞所表达。一个肿瘤细胞可以表达一种或多种肿瘤相关抗原。这些肿瘤相关抗原可在细胞的表面上表达(细胞表面抗原)也可以由肿瘤细胞分泌出来(分泌抗原)，或仍保留在细胞内(细胞内抗原)。

这些肿瘤相关抗原已被用来检测、诊断并定位肿瘤。在某些情况下肿瘤细胞上肿瘤相关抗原的存在就允许了对肿瘤细胞有特异性的特殊药物及其它治疗手段的定向应用。

抗体通常是由动物免疫系统所产生的对外界抗原或抗原决定簇应答的蛋白质。抗体定向地连接在特定的抗原上。例如，对其它黑素瘤抗原的抗体在全身和腹膜内使用后被用来测定人体中特定的肿瘤位置。

随着针对肿瘤细胞上抗原的特异单克隆抗体的发展，一种减少对正常细胞损害的靶向化疗法已成为可能，因为肿瘤细胞上的抗原不会在正常细胞上出现。与特定抗原或抗原决定簇定向的单克隆抗体可以大量地制备。

为了让抗体用来定位和治疗恶性肿瘤，可给它进行标记。这类放射性同位素标记的单克隆抗体可附于肿瘤细胞表面抗原上，通过体外闪烁照像已成功地使病人体内肿瘤成象(Deland,Semin NuclMed.19(3)158-65(Review)(1989)；Juhl,Hepalogastroenterology36(1)；27-32(Review)(1989))。结合药物的抗体可用作一个释放系统，药物通过它可以抗体所定向的特定肿瘤细胞为目标，这是因为全身使用了结合药物的抗体后，抗体有到达肿瘤区域的独特能力。抗体也可与毒素相结合，从而作一个释放系统使毒素定向地运行到特定肿瘤细胞。

通常用于抗体结合物的细胞毒素剂大体分为三类物质：毒素、放射核素和化疗剂。与这三类中每类结合的抗体可作为具一定效力的治疗剂但也存在一些特有的问题(Frankel,el al.Ann,Rev.Med.37:125-142(1986),Reimann et al.,J.Clin.Invest.82(1):129-138(1988).).含有植物毒素的免疫结合物与其它类型的抗体结合物相比有一个独特的长处，因为：

1．抗肿瘤活性所需的免疫毒素的剂量一般要比抗体-药物结合物所需的低得多。

2．毒素与抗体的结合不影响抗体的亲和力。Gelonin是一种糖蛋白(分子量约为29-30,000Kd)，从Gelonium multiforum种子中纯化而得。Gelonin属于强核糖体失活植物毒素类。该类核糖体一失活植物毒素的其它组员是相思豆毒素、蓖麻蛋白和modeccin的链。与相思豆毒素和蓖麻蛋白一样，Gelonin通过损伤哺乳动物核糖体的60s亚单位来抑制蛋白质合成。虽然相思豆毒素的A链(RTA)已广泛用于免疫毒素，但gelonin对化学和物理处理比RTA稳定[Barbieri et al.,Comcer Swrv.1:489-520(1982)]。此外，gelonin本身不与细胞结合，因而是无毒的(除了高浓度外)且在实验室操作中是安全的。核糖体的失活是不可逆的，不涉及辅助因子并有提示酶促作用的效能。