[发明专利]利用胶德克斯氏菌生产富氨基酸、维生素E、B2及有机锗营养液的方法

说明书

本发明涉及一种微生物工业发酵技术，特别是利用胶德克斯氏抗氨固氮菌工业发酵生产富氨基酸、维生素E、B₂单细胞蛋白，有机锗营养液的方法。

利用微生物进行工业发酵，生产单细胞蛋白营养物质，目前已引起有关科学家的重视，并已取得了一些进展，如Donald  O.Hitzman，Bartlesville  okla  L.U.S  Patent  Documents  4302542，1981利用嗜热细菌进行混合发酵，以乙醇等醇类化合物作为碳源和能源来产生单细胞蛋白;杨振华“851”口服液利用人工诱变处理维氏固氮菌（Azotobacter  Vinelandii）而得到一组命名为851黄的抗氨固氮菌，作为工业发酵的生产用菌株，利用所设计的培养基生产富硒单细胞蛋白、维生素和菌肥（以上内容参见1987年9月30日CN86100490B，发明专利申请审定说明书，《利用抗氨固氮菌生产富硒单细胞蛋白，维生素E和菌肥的方法》一文），利用该方法已生产出“851超级口服液”产品，作为人们日常生活中的一种很有营养价值的保健饮料。

本发明的目的是筛选出一种新的具有抗氨固氮性能的微生物菌种以及设计出适合于该菌生长的培养基，要求这种菌不但具有851黄维氏抗氨固氮菌的性能，而且利用其作为生产用菌，采用所设计出的培养基生产出的产品有效成分更为丰富，营养比例更为合理。

本发明的技术方案：

1.菌株

在对某组维氏抗氨固氮菌进行提纯复壮过程中，我们发现了一组边缘无色（或白色）菌落，其细胞型态从显微镜上观察是小杆状，0.2～0.5×1微米，单生。广东省微生物所对该菌进行光学显微镜和电子显微镜观察结果，发现细胞以极生鞭毛运动，在含有结合态氮的液体培养基中有大量运动的细胞，但在缺乏氮的培养基中罕有运动的细胞，革兰氏染色阳性。

培养特征：菌落小杆状，平滑，有光泽，透明;在阿氏贝（Ashby）培养基面上可以生长，呈无色;无机盐氮液培养基上可以生长;甘露醇-酵母培养基斜面上，生长很好，菌落无色;大豆培养基、有机氮丰富液体培养基上生长迅速，呈灰黄色;洋菜培养基上的菌落透明无色，液体培养基上形成菌膜。

生理特征：在无氮液体培养基中，能固定大气中分子态氮，接触酶阳性，无芽孢，孢囊或荚膜，吲哚试验阴性，硝酸盐还原阳性，不利用淀粉，葡萄糖发酵不产生酸，不产气、V.P.阴性，甲基红阴性，石蕊牛奶胨化还原，在16℃～37℃能生长，最适PH为6～8，依据V.B.D.斯克尔曼《细菌属的鉴定指导》发现该菌符合Berger氏鉴定手册所描述的固氮菌科（Azotobacteraceac）德克斯氏属（Derxia）的胶德克斯氏菌（Derxia  gummosa  Jenson，Petersem，De  &  Bhattacharya  1960）（我们命名其为“健字N型菌”1991年2月7日送交武汉中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC  №：M91027）。

2.培养基

健字N型菌对培养基的适应范围很广，可采用多种培养基进行培养。

（1）大豆培养基：

大豆粉  5～15%

氯化钠  0.01～0.02%

硫酸镁  0.03～0.05%

钼酸钠  5～10ppm

硫酸锌  10～30ppm

酵母膏  0.05～0.1%

磷酸氢二钾  0.04～0.08%

磷酸二氢钾  0.03～0.05%

亚硒酸钠  1～5ppm

二氧化锗  4～20ppm

硼酸  5～10ppm

（2）甘露醇-酵母膏培养基：

甘露醇  1%

酵母膏  0.05%

K₂HPO₄0.06%

MgSO₄0.03%

NaCl  0.03%

CaCO₃0.05%

NaMoO₄10ppm

H₃BO₃10ppm

（3）有机氮丰富液体培养基：

干淀粉  1～5%

酵母浸出汁  0.05～0.10%

K₂HPO₄0.05～0.08%