[发明专利]胸膜肺炎放线杆菌亚单元疫苗

说明书

本发明涉及一种保护猪免受胸膜肺炎放线杆菌：(A_pp)感染的疫苗组合物和一种施用这样一种疫苗来保护猪的方法。

猪胸膜肺炎(猪的一种主要呼吸道疾病)遍及全世界，由于高急性的死亡，对急性病猪的处理和慢性感染动物销售的延迟造成严重的经济损失。已经辨明这种疾病的病因学的动因是胸膜肺炎放线杆菌。

它主要是通过动物的直接接触传染的，造成的感染产生一个从高急性到慢性不尽相同的临床过程。这种疾病主要是呼吸道感染，其临诊症状是高烧、严重的呼吸道痛、咳嗽和厌食。该疾病发作快，发病率和死亡率高。具有病理学意义的是在肺中肺损坏的形成和散布。

自然，人们试图采用接种疫苗计划来控制在猪中这样的胸膜肺炎放线杆菌感染。

为此目的，猪已经被接种菌苗，失去活性的胸膜肺炎放线杆菌。这种疫苗的一个缺点是其伴随有严重的副反应。进一步说，菌苗接种主要导致对(脂肪)多糖类产生抗体，这种抗体仅仅对一定胸膜肺炎放线杆菌血清型是特异的，因而不能抵抗其它胸膜肺炎血清型。另外，胸膜肺炎放线杆菌菌苗对田间感染只能得到较小的保护。

胸膜肺炎放线杆菌的被膜提取物已被报道作为保护性抗原。然而，用这样的提取物对猪和鼠的免疫只提供了部分免疫性。另外，基于被膜的疫苗只产生同种的保护，即接种有从一种特定血清型的胸膜肺炎放线杆菌衍生的被膜疫苗的猪不能得到对一个不同血清型的胸膜肺炎放线杆菌攻击的保护。

活的毒性减弱的胸膜肺炎放线杆菌疫苗也带有一系列的缺陷，包括用毒性没有充分减弱的病原体接种动物的危险，以及可能使毒性减弱的细菌转变为致病状态而导致被接种的动物产生疾病，并有可能将病原体传播给其他动物。

因此，长期以来一直需要一种安全的，不依赖血清型的并能在猪体内产生强大的保护性免疫反应的胸膜肺炎放线杆菌疫苗。

因此，本发明的一个目的是提供一个抵抗猪胸膜肺炎的亚单元疫苗，它基本上没有胸膜肺炎放线杆菌细胞，主要包括至少两种从胸膜肺炎放线杆菌衍生的不同的亚单元成分，所说的疫苗

—导致很好的保护以抵抗在猪中的胸膜肺炎放线杆菌的感染

—另外是不依赖血清型的

本发明提供了一种胸膜肺炎放线杆菌疫苗，基本上没有胸膜肺炎放线杆菌细胞，其特征在于：该疫苗由胸膜肺炎放线杆菌的外膜蛋白质制剂衍生得到，具有在SDS-PAGE测量下是42kD的一个主要优势抗原蛋白质成分，以及选自具有下列成分中的至少一种毒素；1.一种在SDS-PAGE测量中大约是105kD的胸膜肺炎放线杆菌的溶血素(Hly)，和2.一种在SDS-PAGE测量下大约是120kD的胸膜肺炎放线杆菌的巨噬细胞毒素(Mat)。

根据本发明，已经发现：胸膜肺炎放线杆菌的溶血素和/或巨噬细胞毒素与胸膜肺炎放线杆菌的外层膜蛋白质制剂(具有一个在SDS-PAGE测量下约为42kD的主要优势抗原蛋白质成分，该制剂以下称为42kD OMP制剂)相结合可以用作抵抗猪中胸膜肺炎放线杆菌感染的疫苗，具有已有技术疫苗没有显示出的突出的保护特性。

已知溶血素可在猪中诱导某些保护。然而，包括溶血素和/或巨噬细胞毒素以及42kD OMP制剂的疫苗对有病毒性的胸膜肺炎放线杆菌细菌的攻击产生完全和异种的保护作用(例3和例5)。这种Hly或Mat成分与42kD OMP的组合物出乎意料地增加了疫苗的保护特性。

溶血素(Hly)的特征在于它：——是一种可被钙诱导的蛋白质可以从胸膜肺炎放线杆菌细胞培养物的上清

液中分离得到——有一个在SDS-PAGE(如这里概述的)测量中为105±5

kD的分子量——与分离出溶血素的血清型是有关连的，它对红血球具有溶血活性，

该活性是：——热敏感的，并且——对蛋白酶K处理敏感。溶血素的溶血活性可以根据例2.1中概述的试验确定。

溶血素的溶血活性，在贮藏期间，除了并不导致免疫特性钝化的105kD蛋白质分子量的减少外，它还是不稳定的和衰减的。因而，所说的丧失了溶血活性的溶血素或仍具有免疫特性的溶血素抗原片段也可加到本发明的疫苗中。

在血清型1-12中，只有1、5a、5b、9、10和11型产生具有溶血活性的溶血素(例2.1)，而其它的血清型产生等同的具有105kD的非溶血性蛋白质，这些蛋白与具有溶血特性的105kD蛋白质溶血素有血清上的联系(见例2.3)。所说的它们的免疫等同物或片段在此也被称为溶血素。

另外，可以看出：用来抵抗从一种胸膜肺炎放线杆菌的溶血血清型衍生的溶血素得到的抗血清与从其他溶血的胸膜肺炎放线杆菌血清型衍生得到的溶血素的溶血活性是相互中和的(例2.3)。