[发明专利]克隆和/或表达的新载体其制备方法及应用

权利要求书

1.产生一种革兰氏阴性细菌的方法，其中包括向这种细菌中引入一种有宽范围宿主的克隆和/或表达载体，其特征在于

a)载体具有在不相容性P组群革兰氏阴性细菌中有由宽范围宿主之质粒衍生的复制原点，

b)载体含有携带质粒RP4之par区域的DNA片段，

c)由于缺失mob座位该载体无法迁移。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于载体具有质粒RK2的复制原点。

3.根据权利要求1的方法，其特征在于载体还含有克隆的多位点。

4.根据权利要求1的方法，其特征在于载体还含有由抗生素抗性基因构成的选择标志。

5.根据权利要求1的方法，其特征在于载体由质粒RK2衍生的、有一个小于20Kb的尾部、含有携带质粒RP4之par区域的DNA片段、不含mob座位、并且必要时含克隆的多位点和选择标志。

6.根据权利要求5的方法，其特征在于载体是质粒PXL1635。

7.根据权利要求1的方法，其特征在于载体还含有重组DNA。

8.根据权利要求7的方法，其特征在于依赖于遗传表达的调节序列的重组DNA含有编码给定之一种或多种多肽的一个或多个结构基团。

9.根据权利要求8的方法，其特征在于所说的结构基因可依赖于其固有的调节序列或不同的调节序列。

10.根据权利要求8的方法，其特征在于遗传表达的调节序列是由选自于启动子、终止密码子、信号肽和核蛋白体固定位点的一个或多个元件组成的。

11.根据权利要求8的方法，其特征在于其中一个或多个结构基团编码选自于酶、激素、生长因子，优选选自于白蛋白、tPA、TIMP、白细胞介素、脱辅基脂蛋白和干扰素的蛋白质。

12.根据权利要求8的方法，其特征在于其中的一个或多个结构基团是在遗传与生物化学水平上参与代谢产物之生物合成的基因。

13.根据权利要求12的方法，其特征在于其中代谢产物选自于维生素、抗生素、氨基酸和所有其他细菌代谢产物。

14.根据权利要求13的方法，其特征在于所说的代谢产物选自于维生素B12、生物素、核黄素、赖氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、青霉素和四环素。

15.生产蛋白质或代谢产物的方法，其特征在于：

-在革兰氏阴性细菌中引入权利要求7至14中所定义的载体，该载体含有编码所述蛋白质的结构基因或在遗传或生物化学水平上参与所述代谢产物之生物合成的一个或多个基因，

-在一个或多个所述基因的表达条件下培养所说的细菌，

-回收所产生的蛋白质或代谢产物。