[发明专利]制备具有逆病毒基因表达能力和翻译后加工能力的质粒的方法和产生的质粒及其表达产物

说明书

本发明涉及一种制备表达载体的方法和产生的质粒及由该制备方法获得的表达产物，该载体允许同时进行逆病毒基因表达和翻译后加工。更详细地说，本发明涉及一种制备质粒的方法，该方法通过应用重组体DNA技术引起逆病毒gag和pol基因表达，同时通过其中蛋白酶引起上述表达产物本身的加工，和大量产生三种由gag基因编码的核心蛋白质，包括p17、p24和p15，及三种由pol基因编码的酶，包括蛋白酶，逆转录酶和整合酶，各自和独立以成熟或活性蛋白质分子的形式。以及由上述方法获得的质粒及其表达产物。本发明也提供具有nef基因高表达能力的质粒和其表达产物的Nef蛋白质分子。

逆病毒是类属于逆病毒家族的种属名称，其特征在于如同被膜，单链RNA基因组和逆转录酶那样的一般特征。这种病毒为直径80-100nm的球形，其基因组由分子量约3×10⁶的两个线性（+）链RNA分子组成。这两个分子形成转化二聚体。

更详细地说，逆病毒科进一步分成下述三个亚科：肿瘤病毒，慢病毒和泡沫病毒（R.E.F.Matthews  Edt.“Classification  and  Nomenclature  of  Viruses-Fourth  Report  of  the  International  Committee  on  Taxonomy  of  Viruses”，pp124-pp128，S.Karger〔swiss〕，1982）。分类作为肿瘤病毒，也称为RNA肿瘤病毒的已知病毒包括人的T细胞白血病病毒，猫白血病毒鼠类肉瘤病毒、莫洛尼氏鼠类白血病毒、牛白血病毒、猪白血病毒、鸟类白血病病毒、鸟类肉瘤病毒、鸟类成髓细胞瘤病毒和劳氏相关的病毒。归入引起慢性病毒感染的通常称为慢病毒这一类的已知病毒包括1型和2型人的免疫缺乏病毒（下文分别称为“HIV-1”和“HIV-2”），猿猴免疫缺乏病毒、引起羊脑脊髓炎的维斯纳（Visna）病毒、引起南非羊肺炎的梅迪（meadi）病毒、羊的关节炎脑炎病毒、马感染性贫血病毒和牛淋巴结炎病毒（“Current  Topics  in  AIDS，”Vol.1，pp.95-117，John  Wiler  &  Sons，1987;Advances  in  Virus  Research，Vol.34，P.189-215，1988）。归入泡沫病毒这一类的病毒，使象人、猴、牛和猫这样的哺乳动物感染。由这些宿主分离出的泡沫病毒和合胞体病毒是众所周知的。按照本文使用的术语逆病毒可理解为包括所有病毒，已知的和未知的，也可如上面所述描述成的逆病毒。

不仅从逆病毒在人和其他动物中引起严重的和往往是致命的疾病感染观点来看，逆病毒是重要的，而且对于判断如肉瘤那样的疾病以及对于制备用于研究和遗传工程中物质来说，逆病毒也是有用的。因此，已出版了很多有关这些病毒的文献。众所周知，在1980年以前，作为用于致癌基因机制的模型已研究过逆病毒，并且逆病毒与新的和奇怪的慢病毒感染疾病有连带关系，这种疾病引起不能治愈的继发疾病。自从1981年在美国发现AIDS疾病以来，为了制定治疗疗和预防AIDS的方法，关于各种逆病毒的研究已利用包括流行病学、免疫学、病毒学和分子生物学在内的全部技术领域进行深入细致的研究。已经积累了大量有用的关于AIDS的报告（Advancesin  Virus  Research，Vol.34，PP.189-215，1988;Annual  Review  of  Immunology，Vol.6，PP.139-159，1988;Microbial  Pathogenesis，Vol.5，PP.149-157，1988;“HIV  and  Other  Highly  Pathogenic，Viruses”PP.33-41，Academic  Press，Inc.，1988;“The  control  of  Human  Retrovirus  Gene  Expression”.PP.79-89，Cold  Spring  Harbor  Laboratory，1988;Cytological  Engineering，Vol.7（Suppl.1），PP.S5-S15，1988）。