[发明专利]人类乳头状瘤病毒肽的表达以及在致免疫组合物中的应用

说明书

本发明涉及重组细胞、肽、抗体、组合物以及能够用来抑制和治疗人类乳头状瘤病毒（HPV）感染和细胞转化的方法。

包含并表达一种编码了HPV一个蛋白区域的DNA插入物或一种由哺乳动物细胞中的HPV基因诱发的肽的重组细胞被制备出来，例如像表达HPV E₆或E₇核蛋白基因产物的一个抗原决定区域的重组牛痘病毒，或包含和表达HPV的E₆或E₇核蛋白基因产物的一个区域的转染的或重组病毒感染的重新构建的成纤维细胞，上皮细胞，淋巴或肿瘤细胞。与HPV₁₆E₆和E₇蛋白的抗原决定区域相应的特异肽已被制备出来，而且这些肽已被用于致免疫组合物和疫苗中。并描述了抑制和消退患者体内的HPV感染和肿瘤发展的治疗和预防的方法。

对实验动物，特别是啮齿动物的研究表明大多数由致瘤病毒引发的肿瘤表达了由病毒基因组编码的抗原，而且采用这些抗原的免疫法可导致随后的由相同病毒诱发的肿瘤细胞激发的排异反应。尽管这些研究的大部分是利用实验室病毒株进行的，例如SV₄₀，多瘤病毒，及Friend，Moloney，或Rauscher鼠白血病病毒，但实际上瘤诱发病毒的水平和垂直传染已被证实：现在确实可以得到对抗病毒诱发的猫白血病和肉瘤的商业疫苗。

相比之下，大多数人类癌症的病毒病原学说尚未被证实，可能的例外是肝炎病毒（肝细胞瘤），Epstein  Barr病毒（鼻咽癌），以及人类乳头状瘤病毒（HPV16）（宫颈癌）。然而，在过去的二十年中，已经证实，某些人类肿瘤细胞表达肿瘤抗原，即能够将肿瘤细胞与其正常细胞区别开的抗原，某些患者对于这些抗原产生细胞-传导的或体液免疫应答（Hellstrom等，1968年，Nature，220：1352;Morton等，1968年，Science，162：1279-1281;Shiku等，1976，J.Exp.Med.144：873-881）。这些免疫反应的某些靶是由人类基因组编码的胎儿瘤抗原或分化抗原（Hellstrom等，1970，Int.J.Cancer  6：346-351）。

直到目前为止，肿瘤抗原的分子特性仍是未知的，而且肿瘤的这种免疫学反应的特异性程度也不清楚。而试图将这些信息用在发展癌症的诊断测定或癌症的治疗方面的作法也很不成功。由于肿瘤的自发消退几乎罕见，因此，人们可以得出结论，即在玻璃试管中被证实的免疫应答并非在体内有效。例如，来自癌症患者体内的抗体及淋巴细胞可有效地用于杀灭玻璃试管内的肿瘤细胞，而同一癌症患者的免疫应答在体内却不足以阻止肿瘤的发展。

由Kohler和Milstein所发展的单克隆抗体技术（1975年，Nature，256：495-497）引导了对于人类肿瘤抗原的深入的研究，因为该技术不仅在分子水平上而且在特异性方面为定义这样一些抗原提供了手段（Hellstrom和Brown，1979，in  The  Antigens，M.Sala，ed.，Academic  Press，Vol.V：1-66）。

在过去几年中，已描述了大量的与肿瘤有关的抗原，其中大多数已采用小鼠单克隆抗体进行了定义（Reisfeld和Sell  eds.编缉，1985年，in  Monoclonal  Antibodies  and  Cancer  Tllerapy，UCLA  Symposia  on  Molecular  and  Cellular  Biology，New  Serres，Vol.27，Alan  R.Liss，Inc.New  York，pp.1-609）。虽然实际上所有已明确描述的抗原都已被证明是胎儿瘤或分化抗原，而且它们对于肿瘤的特异性已被发现是定量的而不是定性的，有几种抗原对于肿瘤细胞和正常细胞具有足够的特异性（通常对应一个10到1000倍的因子），以致可以用作鉴别肿瘤细胞和治疗的潜在目标。针对肿瘤抗原的人类单克隆抗体也已得到（Cote等，1983年，Proc.Natl.Acad.Sci.80：2026-2030）。这就支持了前面所引用的证据，即某些癌症患者增强了对其肿瘤的免疫应答。许多这些肿瘤抗原是由人类染色体编码的，而在某些情况下，这些肿瘤抗原是内原性或外原性病毒感染的结果。

人类乳头状瘤病毒是众所周知的在其宿主内产生上皮细胞瘤如疣和乳头状瘤的传染剂。普通手疣和足跖疣是人类最常见的皮肤损害;然而，在男性和女性中的鳞状细胞癌和生殖器癌也普通与某些HPV感染株有关。