[发明专利]一种哺乳类动物生雌性控方法

说明书

本发明属于哺乳类动物性别比例控制技术领域，特别涉及在雌性哺乳类动物体内杀死雄性胚胎的方法。

在公知技术中，与本发明较为相关的技术是利用含有H-Y抗体的抗血清在动物体外鉴别胚胎的性别。在这方面，南朝鲜的Im等人（Anim.Biotech.Bull.34-37，1991），国内许晓霁等人（东北农学院学报，2∶186-191，1990）近年来都曾用含有H-Y抗体的抗血清鉴定过小鼠和兔子胚胎的性别，其准确率达80%左右。但由于这种方法需要先将胚胚移到动物体外，经鉴定性别后，再移回动物体内，所以不仅技术复杂，操作麻烦，同时还降低了胚胎的活力，使其成活率下降，致使这种方法难以在生产中推广应用。

本发明的目的在于提供一种在哺乳类动物体内能有效地杀死雄性胚胎并使之多生雌性后代的方法。

本发明所依据的理论是免疫学原理，即在雄性胚胎中存在有H-Y抗原，可与H-Y抗体发生反应，如有补体存在，则可介导补体参与反应，从而导致雄性胚胎溶解死亡。本发明的技术解决方案可以包括下述两个方面：

1、在雌性动物受精后3-5天，胚胎发育至8细胞期至早期囊胚阶段时，把H-Y单克隆抗体与补体同时输入怀孕动物的子宫角，在怀孕动物体内杀死雄性胚胎。

2、一种用于在怀孕动物体内杀死雄性胚胎的H-Y单克隆抗体的制备方法，包括：

（1）用G57BL/6纯系小鼠制取脾细胞;

（2）筛选并准备SP2/0骨髓瘤细胞;

（3）饲养细胞;

（4）将脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合;

（5）筛选含有杂交瘤的阳性孔及克隆;

（6）收集H-Y单克隆抗体;

（6.1）血清DMEM培养上清液;

（6.2）无血清DMEM培养上清液;

（6.3）给C57BL/6雌性小鼠接种;

（7）对杂交瘤细胞及H-Y单克隆抗体进行鉴定，其主要特点是：

（1.1）将雄性小鼠脾细胞注射给雌性小鼠的时间为连续56-91天，每7天注射一次，于第42-77天时进行眼眶采血，检测血清抗体效价;

（5.1）用生物素化第二抗体和酶标记亲合素代替常规ELISA的酶标记第二抗体，用含有BSA（牛血清白蛋白）的PBS（磷酸盐缓冲液）作为冲洗液冲洗ELISA反应板;

（5.1.1）BSA的浓度为0.1%。

本发明具有以下积极效果：

1.本发明为哺乳类动物特别是家畜生雌性控技术的应用提供了一条新的途径。通过对30只小鼠和10只家兔的试验，在获得的100多只后代中，雌性后代的百分率平均为84%以上。

2、使用本发明无论多胎动物还是单胎动物均可多生雌性。在多胎动物中，如绵羊、山羊，用PMSG（孕马血清促性腺激素）和HCG（人绒毛膜促进腺激素）使动物多排卵，然后再应用H-Y单克隆抗体。这样在杀死雄性胚胎之后，所剩雌性胚胎的数目比自然排卵的总数还多，因此，在使动物多生雌性后代的同时，后代总数也有所增加。在单胎动物中，如奶牛，如果怀孕雌性胚胎，则在应用H-Y单克隆抗体之后，对其无任何不良影响;若怀孕雌性胚胎，则将其杀死。待过一个发情周期后，再行配种，其结果使奶牛多生雌性后代。

3、成本低。据计算，利用本发明使家兔、绵羊、奶牛每生一只（头）雌性后代的花费仅分别为0.5元、5元和10元人民币，而产生的经济效益则比自然生产提高一倍至几十倍。

4、方法简便，容易操作，便于推广。应用本发明时，只需把H-Y单克隆抗体输入子宫，故一般同行技术人员都可以熟练掌握操作。对H-Y单克隆抗体，只要具备所需的实验室条件，按本发明的方法，步骤便可制取。

下面结合实施例对本发明作进一步阐述：

实施例1