[发明专利]检测抗丙型肝炎病毒抗体的方法

说明书

本发明涉及用于检测并定量丙型肝炎病毒(HCV)感染的新的线性肽及其混合物。这些肽亦可用作为HCV感染之疫苗中的活性成分。

1973年，引入了一个新的术语：非甲非乙型肝炎(NANB)来描述一种与甲型肝炎或乙型肝炎病毒都没有关联的肝炎。推测NANB是由一种以上的病原因子引起的。确实，此后已鉴定了两种新的负责传播肝炎的病毒。第一种戊型肝炎病毒，该病毒同甲型肝炎病毒一样是通过污染的水传播的。第二种是丙型肝炎病毒，与乙型肝炎病毒相似，该病毒主要是通过被感染的血液传染的。丙型肝炎是那些甲和乙型肝炎血清阴性的病人中最常见到的病毒性肝炎。

尽管为鉴定并消除所有肝炎病毒感染的供血血源作了大量的工作，但仍不断有关于发生输血相关肝炎的报导。常见的是无症状的带病毒者，而且他们常常在感染后10至30年内发展为肝硬化及肝细胞癌。根据其发现地区的统计，在所有输血后肝炎病例中，有50-90％是由HCV感染引起的，而且HCV确实造成了一个世界范围内的主要公共保健问题。

到目前为止，鉴定和分离HCV的尝试尚未获得成功。美国人进行的两次研究证明，NANB感染的血清常常见有丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性提高，或者抗乙型肝炎病毒核心抗原的抗体(抗HBc抗体)呈现阳性。因此，1987年决定针对ALT和抗HBc两项指标筛选所有的血液备用品。据信这些试验已防止了多达50％的输血相关NANB肝炎的发生。

1989年鉴定并克隆了HCV(Choo et al.，Science，244，349-362，1989)。HCV是长10kb的单链RNA病毒，它与黄色病毒有远亲关系，已根据对HCVRNA的序列同黄色病毒RNA的序列相比较，提出了有关HCV的一般组织结构的报导。据信HCV RNA被转译成单一的前体蛋白质，后者进一步被裂解成7或8个较小的蛋白质片段。一般认为前体的第一个区带包括三个分别称为C(核心)、M(膜)和E(外壳)的结构蛋白质分子。但M和E蛋白可被融合在单一蛋白质中。前体的第二个区带包括5个分别定名为NS₁至NS₅的非结构蛋白质。NS₂可能是一种蛋白酶，且NS₅可能是RNA聚合酶。

已经发展了几种利用HCV病毒蛋白的各区域来进行HCV诊断试验的方法(如Kuo et al.，Science，244，362-364，1989)。其中一个试验使用了称为C100-3的蛋白质片段。其为含有NS₃和NS₄非结构蛋白质的融合蛋白。在ELISA试验中，该蛋白质并没有显示出100％有效性。例如，一些有关报导指出，该试验在临床上只能诊断出10-29％发生在感染后不超过90天的急性HCV感染病例，而对于慢性HCV感染病例也只能诊断67-85％(HCV Learning Guide；Abbott Diagnostics Educatio n al Services，April1990；Kuo et al.，Science，244，362-364，1989；Esteban et al.，Lancet，2，294-296，1989；van der Poel et al.，Lancet，2，297-298，1989；Janot et al.，Lancet 2，796-797，1989；Bruix et al.，Lancet 2，1004-1006，1989；Colombo et al.，Lancet 2，1006-1008，1989)。可见，在用于HCV普查中，这些检测法没有显示出足够的灵敏性。

这些HCV检测法的特异性也很低。有的还因为与过氧化物歧化酶反应(用于该检测法中的HCV C100-3蛋白质片段是作为与过氧化物歧化酶(SOD)形成融合蛋白表达的)(Ikeda et al.，Lancet，335：1345-1346，1990)、与类风湿因子反应(Theilman et al.，Lancet，335：1346，1990)或因于高球蛋白血症状态等与自家免疫慢性活动性肝炎直接相关的因素反应(McFarlane et al，Lancet，335：754-757，1990；Boudart et al.，Lancet，336：63，1990)而呈现假阳性。