[发明专利]尖吻蝮蛇毒去纤酶纯化方法

权利要求书

1、尖吻蝮蛇毒去纤酶的纯化方法，它包括：(1)蛇毒用缓冲液溶解，离心沉淀经阴离子交换剂柱层析，用缓冲液洗脱粗分得凝血酶样酶组分；(2)将所得凝血酶样酶组分又分别经阴离子交换剂柱层析，纯化得精制的凝血酶样酶；(3)将精制凝血酶样酶原液再经脱盐得去纤酶原液；(4)将所得去纤酶原液配方，过滤、分装、冷冻、干燥、熔封、即得注射用去纤酶成品；其特征在于：

a、蛇毒用PH7.8-8.6的缓冲液溶解，经阴离子交换剂柱层析，用PH7.8-8.6缓冲液氯化钠直线梯度洗脱粗分得凝血酶样酶组分；

b、将所得凝血酶样酶组分按顺序或分两组经阴离子交换剂两次以上柱层析，用PH7.8-8.6缓冲液氯化钠直线梯度两次以上洗脱纯化得精制凝血酶样酶原液；

c、粗分所得凝血酶样酶组分及再纯化中所得凝血酶样酶原液可直接上样，全工序操作在10℃～20℃半无菌或无菌室中进行。

2、根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于溶解蛇毒所用的缓冲液是0.05～0.10M  Tris-HCl缓冲液或甘氨酸-NaOH缓冲液。

3、根据权利要求1所说的纯化方法，其特征在于粗分所用阴离子交换剂是DEAE-Sephadex  A-50或QAE-Sepha-dex  A-25。

4、根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于粗分所用氯化钠梯度为0～1.2M。

5、根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于两次以上纯化柱层析所用阴离子交换剂是DEAE-纤维素DE52或DE32和DEAE-Sephadex  A-50或QAE-Sephadex  A-25。

6、根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于两次以上柱层析纯化洗脱所用缓冲液氯化钠梯度为0.1～0.7M，0.3～0.9M。