[发明专利]疫苗

说明书

本发明涉及一类新的疫苗制剂，制备该类制剂的方法及其在治疗中的应用。具体讲，本发明涉及一类新的治疗单纯疱疹病毒感染的制剂，更具体说来涉及治疗单纯疱疹病毒2(HSV-2)感染的制剂。

HSV-2是生殖器疱疹的原发病原学体，HSV-2和HSV-1(疱疹成因体，单纯疱疹病毒)的特点在于主要在神经元神经节细胞中诱发急性病又会导致隐性感染。

据估计，仅仅在美国大约有5百万人患有生殖疱疹，每年临床记录病例有50万(原发和复发性感染)，原发感染主要发生在青春期后，其特点在于局部出现皮肤疼痛损伤，持续2-3周。在原发性感染后的六个月后，有50％的患者仍会复发这种病。其中25％左右的患者每年将会复发10-15次。免疫损害的患者中，据统计高复发率要比一般的患者高。

HSV-1和HSV-2病毒均在表面具有许多糖蛋白成分，这些成分称为gA、gB、gC、gD、gE等。

糖蛋白D位于该病毒膜上，在感染细胞胞桨中也发现有(Eisen-berg R.J.等人；J of Virol 1980 35 428-435)。gD包含信号肽在内的393个氨基酸，其分子量约为60kD。在所有HSV包膜糖蛋白中，这可能是其最好的特性(Cohen等人，J.Virology 60 157-166)。在体内据说这对于病毒附着于细胞膜上起着重要作用。而且，业已证明糖蛋白D也能在体内诱发中和抗体(Eing等人，J.Med.Virology 127：59-65)。然而，仅管在患者血清中中和抗体的效价高，但隐性HSV-2病毒仍能被再激活并诱导所说疾病复发。

仅仅具有诱导中和抗体的能力还不足以控制这类疾病，为了防止这类疾病的复发，对于任何疫苗来说，不仅需其刺激中和抗体，而且还要能刺激通过T-细胞介导的细胞免疫。本发明的方法能实现这些目的。

本发明提供的疫苗包括与3-O-脱酰单磷酰基脂A(3D-MPL)(一种单磷酰脂A的脱酰衍生物)及适宜的载体混合的HSV糖蛋白D或其免疫学片段。一般而言，该糖蛋白D来源于HSV-2。所说载体可以是水包油型乳液或明矾，所说3D-MPL的量(每剂)为10μg～100μg，优选25μg～50μg，其中所说抗原一般每剂为2～50μg。

可根据英国专利(2220211号)(R1B1)中披露的方法制备3D-MPL。

本发明的实施方案中，使用截短的308个氨基酸的HSV-2糖蛋白D，该糖蛋白D包括1-306天然存在的糖蛋白的氨基酸和外加在截短的无膜固着区蛋白的C末端的天门冬酰胺和谷氨酰胺。

此种形式的蛋白质包括能被分裂产生成熟的283个氨基酸蛋白的信号肽。Genentech的Ep-B-139，417中已对在中国仓鼠卵细胞中产生的这种蛋白质作了介绍。

优先选用该成熟的断片制备本发明的疫苗制剂，该断片称作rgD2t。

可用化学或其他方法将HSV抗原与粒状载体结合，最优选的办法是通过化学方法借助位于肝炎B表面抗原表面上的游离巯基与粒状肝炎B表面抗原结合，参见中请待批的U.K9027623.9号申请。

本发明的制剂在诱导保护性免疫方面，甚至在抗原剂量非常低(例如低至5μg rgD₂t)时也是非常有效的。

本发明的制剂在使之免遭原发性感染和刺激方面效果特别优异，无论对于特异性体液(中和抗体)还是对于效应基因细胞介导(DTH)免疫应答方面均是如此。

水包油型的无毒乳液优选含无毒油(如角鲨烷或角鲨烯)、吐温80这类乳化剂，载体水。

所说载体水例如磷酸盐缓冲盐水。

本发明还提供一种如其中所说的用于医药治疗，特别用于治疗或预防HSV感染的疫苗制剂。本发明的疫苗包括免疫保护量的HSVgD或其免疫学片段，该疫苗可用惯常方法制备。

在Voller等人编辑的“New Trends and Developments invaccines”(University park press，Baltimore，Maryland，U.S.A.1978)中概括性地披露了疫苗的制备方法。Fullerton的US 4,235,877号专利中介绍了脂质体胶囊。Likhite的US 4,372,945和Armor等人的US 4,474,757号专利中披露了蛋白与大分子的结合。