[发明专利]表达多肽的方法

说明书

本发明涉及表达多肽的方法，特别是涉及使用蓝绿藻细胞作为宿主，并用含有编码多肽之结构基因的载体转化这些宿主以有效地表达该生理学活性多肽的方法。

蓝绿藻(也称蓝藻细菌)，如大肠杆菌等是没有核膜的原核细胞。但蓝绿藻具有与较高等植物特别是红藻相似的光合作用系统，可利用太阳光作为能源，由水和二氧化碳及少量无机盐生物合成有机物质，并可大量自养增殖。

另外，很久以前就知道许多种蓝绿藻(如螺旋藻、隐杆藻、念珠藻等)可供食用，且一直未见有关于它们的致病性及可在动物体内寄生的报导。因此，蓝绿藻很适于用作基因重组的宿主，并具有极好的安全性。

如果能够将编码有用生理学活性肽的基因导入蓝绿藻内并大量表达之，便有可能以低成本、低能耗和更便宜的来源生产食物、功能性食品或饲料，而不会象生产农作物那样受到季节和气候的影响，另外还可望能够生产药品，不包括在医药中但可用于治序目的的化学物质、以及化妆品等的原料。

近年来，使用蓝绿藻的宿主一载体系统已得到迅速发展，并已报导使用Anacystis nidulans R2(SynechococcusPCC7942)、Agmenellus quadruplicatum(Synechococcus  PCC 7002)、SynechocystisPCC 6803和Anabaena PCC 7120等菌种表达许多异源蛋白质基因〔参见G.D.Price and M.R.Badger，Plant Physiol，91：505-513(1989)表达人碳酸酐酶和大肠杆菌的lac IQ 阻遏蛋白；R.deLorimier et al.，J.Bacteriol，169：1830-1835(1987)表达较高等藻类Cyanophoraparadoxa的别藻蓝蛋白；I.V.Elanskaya and I.B.Morzunova，Mol.Genet.Mikrobiol.Virusol，0(9)：7-11(1989)表达Bacillusamyloliquefaciens A50的α淀粉酶；N.Tandeau deMarsac et al.，Mol.Gen.Genet.209：396-398(1987)表达B.shaericus 1593M的杀昆虫蛋白；C.Angsuthanasombat and S.Panyim，ApplEnviron.Microbid.55：2428-2430(1989)，表达B.thuringiensis var.israelensis的130KDaδ-内毒素；Y.Cai and C.P.Wolk，J.Bacteriol，172：3138-3145(1990)表达B.subtilis的果聚糖生成酶；G.Schmetterer etal.，J.Bacteriol，167：411-414(1986)表达Vibrio harvei和V.fischeri的荧光素酶；D.J.Scanlan et al.，Gene 90：43-49(1990)，M.R.Schaefer and S.S.Golden，J.Bacteriol，171：3973-3981(1989)和J.S.Buzby et al.，Science 230：805-807(1985)表达Escherichia coli的β半乳糖苷酶；D.A.Lightfoot et al.，Plant Mol.Biol，11：335-344(1988)表达Escherichia coli的谷氨酸脱氢酶； R.C.Murphy et al.，J.Bacteriol，172：967-976(1990)表达Escherichia coli的recA蛋白；M.Y.Gruber et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：2608-2612(1990)表达Escherichia coli的Mn超氧化物歧化酶；J.Pierce et al.，Proc，Natl.Acad.Sci.USA86：5753-5757(1989)光合细菌Rhodospiri-llum rubrum之RuBis CO的表达；D.Friedbergand J.Seijffers，Mol.Gen.Genet.203：505-510(1986)λ噬菌体之cI阻遏蛋白的表达〕。