[发明专利]重组的百日咳毒素B寡聚体

权利要求书

1、包含亚基S2、S3、S4和S5的百日咳毒素B寡聚体样多聚体蛋白质，其中S4是蛋氨酰成熟多肽，或该多聚体的类似物或衍生物。

2、根据权利要求1的百日咳毒素B寡聚体样多聚体蛋白质，其中亚基S2、S3、S4和S5的化学计算的摩尔比例分别为大约1∶1∶2∶1。

3、抗百日咳疫苗，其包含有效量的权利要求1或2的百日咳毒素B寡聚体样多聚体蛋白质。

4、由重组亚基生产百日咳毒素B寡聚体样多聚体蛋白质的方法，该方法包括分别在异源表达宿主中表达亚基S2、S3、S4和S5的顺反子成分，或其任何位点特异性密码子取代或加入，并使重组亚基的混合物在体外结合，以形成具有诱导抗百日咳毒素免疫保护反应之能力的亚基的多聚体合成物。

5、根据权利要求4的方法，其中多聚体组份具有诱导抗百日咳疾病之免疫保护反应的能力。

6、根据权利要求4的方法，其中个别S2、S3、S4和S5亚基是以任何化学计算量的摩尔比例混合的。

7、根据权利要求4的方法，其中个别S2、S3、S4和S5亚基是以约为1∶1∶2∶1的化学计算的摩尔比混合的。

8、根据权利要求4的方法其中混合物是在还原条件下溶解重组亚基S2、S3、S4和S5，然后再使之经受氧化条件而形成。

9、根据权利要求8的方法，其中还原剂是二硫苏糖醇（DTT）。

10、根据权利要求8的方法，其中氧化剂是空气和Cu₂SO₄。

11、根据权利要求8的方法，其中混合物是在增溶剂（Chaotrope）、去污剂或变性剂存在下形成的。

12、根据权利要求11的方法，其中增溶剂/变性剂是盐酸鈲。

13、根据权利要求11的方法，其中增溶剂/变性剂是尿素。

14、根据权利要求11的方法，其中在氧化后，降低增溶剂、去污剂或变性剂的浓度，或改变成另一种低浓度的增溶剂、去污剂或变性剂，以利于亚基折迭及使他们结合成多聚体蛋白质。

15、根据权利要求14的方法，其中交换增溶剂/变性剂是盐酸鈲。

16、根据权利要求14的方法，其中交换增溶剂/变性剂是尿素。

17、根据权利要求4的方法，其中异源宿主是原核生物体。

18、根据权利要求17的方法，其中原核宿主是大肠杆菌。

19、根据权利要求18的方法，其中重组S2、S3、S4和S5亚基是以包含体的形式从大肠杆菌中回收的。

20、根据权利要求19的方法，其中重组亚基的多聚体合成物是用层析法纯化的。

21、根据权利要求20的方法，其中重组亚基的多聚体合成物是用亲和层析法纯化的。

22、根据权利要求21的方法，其中重组亚基的多聚体合成物是用胎蛋白亲和层析法纯化的。

23、根据权利要求22的方法，其中重组亚基的多聚体合成物是用结合珠蛋白亲和层析法纯化的。