[发明专利]菜籽饼和棉籽饼混合的微生物脱毒方法

说明书

本发明涉及一种菜籽饼和棉籽饼混合的微生物脱毒制备发酵饲料蛋白的方法。

我国菜籽、棉籽榨油后的菜籽饼、棉籽饼，蛋白含量都高达35～40%。但由于菜籽饼含有毒性物质葡萄糖硫苷、棉籽饼则含有游离棉酚，目前大部分用作肥料，造成蛋白资源的浪费。我国粮食虽然总产量不低，但我国人多地少，现有耕地占世界耕地面积7%，要养活占世界21%的人口。世界平均每人占有耕地5.5亩，我国仅1.5亩，而且还在不断减少。我国不可能提供更多的粮食做为饲料，特别是蛋白源更感不足，近年来由于沿海海域污染严重，鱼粉产量锐减、价格暴涨，大豆种植面积减少，特别在自然灾害的威胁下问题更加突出。因此，开发不争夺粮食的饲料资源菜籽饼、棉籽饼具有明显的经济效益和社会效益。

CN  89100503.X和CN  90104543.8两份专利申请分别公开了棉籽饼和菜籽饼的微生物脱毒方法。它们所利用的微生物的脱毒作用都是单一的，前者只能对棉籽饼进行脱毒，而不能对菜籽饼脱毒，后者则只能对菜籽饼进行脱毒而不能对棉籽饼脱毒。因此，当需要同时对菜籽饼和棉籽饼进行脱毒时，必须培育两种不同的脱毒菌种，而且脱毒过程必须分开进行，工艺比较烦琐，费时费力。

本发明的目的是提供一种能同时对棉籽饼和菜籽饼进行脱毒的方法，以克服上述已有技术所存在的缺点。

本发明是通过筛选对菜籽饼、棉籽饼的毒性都具有脱毒作用的曲霉（Aspergillus.SP.）或根霉（Rhizopus.SP.）菌种，经扩大培养后接入菜籽饼和棉籽饼的混合原料中进行发酵脱毒，原料中适当加入玉米粉或（和）麦麸或（和）糠，可以促进微生物生长，如果再加入少量羽毛粉、血粉，可以提高产品的营养价值。

本发明所用的曲霉或根霉菌种，是通过常规方法从霉变的菜籽饼或施用菜籽饼作肥料的土壤中分离培养得到的。具体方法如下：

1.制备菜籽饼抽提液的查氏（Czapek）培养基：量取100ml水煮沸，称取20g菜籽饼倒入沸水中、再煮沸5分钟，过滤，再加水补充到100ml，即为抽提液。用100ml查氏培养基剂量加入抽提液中，15磅/英寸²灭菌20分钟，即为菜籽饼抽提液查氏培养基。

2.制备醋酸棉酚查氏培养基：

a.称取400mg醋酸棉酚，用10ml无菌碳酸钠水溶液（碳酸钠浓度0.75%）溶解，然后加无菌水稀释至30ml，制成醋酸棉酚碳酸钠水溶液，用盐酸调至PH6.5，沸水浴加热5分钟。

b.用100ml查氏培养基剂量，配制成70ml浓缩培养基15磅/英寸²灭菌20分钟。

c.将上述a、b两种成分混合后倒平板。

3.从霉变的菜籽饼或施用菜籽饼作肥料的土壤中取样，稀释后涂布在菜籽饼抽提液查氏培养基平板上，30℃培养3-4天，选出对菜籽饼具有脱毒作用的菌种。（菌种特征如CN90104543.8号专利申请所述）。

4.将上述对菜籽饼有脱毒作用的菌种，制成孢子悬浮液涂布在含有醋酸棉酚查氏培养基平板上，30℃培养3～4天，即可选出既保留对菜籽饼仍有脱毒力又能对棉籽饼游离棉酚进行降解转化的具有双重脱毒作用的菌株。

5.菌种鉴别：经过分离纯化后进行鉴别测定，选出对菜籽饼和棉籽饼都具有脱毒作用的菌种：其中一种属于曲霉属（Aspergillus.SP.），其特征菌落直径1～2厘米，呈密绒毛状，菌丝白色，有横隔，具足细胞，顶囊球状，孢子黄绿色，表面疣状。另一种属于根霉（Rhizopus.SP.），菌落2～3厘米，疏松棉絮状，菌丝白色，无横隔，有假根，孢子囊黑色，孢子表面有棘状突起。

6.制备孢子斜面菌种：将分离出来的具有脱毒能力，生长快的曲霉或根霉菌种，按常规方法分别纯化培养后，分别接种于马铃薯斜面培养基，30℃培养3～4天长出孢子后，于4～5℃保存，做为孢子斜面菌种，制备生产菌种时，只需用曲霉或根霉一种。

下面对本发明的棉籽饼和菜籽饼混合脱毒方法作具体的描述：

1.制备生产菌种：用孢子斜面菌种一支，分开接种于4个1000ml三角瓶的扩大培养基，培养基成份为（每瓶）：麦麸150～200g，K2HPO₄1.5～2g，加水90～120ml混匀，灭菌冷却。接种后，在30～32℃培养3～4天，即为一级三角瓶菌种。每瓶一级三角瓶菌种可再扩大培养30～40个二级三角瓶菌种。每瓶二级三角瓶菌种可接入生产菌种培养基2～3Kg。生产菌种培养基成份为菜籽饼1份、棉籽饼1份、麦麸4份、玉糠4份，按总重量的50～70%加水混匀，灭菌冷却。接种后在30～35℃培养3～4天即为生产菌种。