[发明专利]乙肝病毒基因扩增检测前的样本处理方法

说明书

本发明涉及生物化学、酶学、突变或遗传过程，是在变异或遗传工程中涉及基因工程的DNA或其分离、制备或纯化，其宿主的应用;进一步说，是涉及由二个或二个以上细胞融合、DNA片段、编码性微生物蛋白质，如内毒素的基因，具体地说，是涉及编码病毒蛋白质的基因，如肝炎病毒。

据统计，全世界约有2亿以上人携带HBV（乙肝病毒），而我国受HBV感染的人至少有1亿以上。大量证据表明：HBV持续感染和肝癌发生有相关关系，据报道，HBV感染人群中发生肝癌的相对危险性为非感染人群的200倍以上，肝癌患者中血清HBV标志流行率也较高，用放免法检测HBeAg，在对照人群中低于6%，而肝癌患者的血清中HBeAg阳性率达45%至80%，如果包括将抗HBe也作为HBV感染的标志，则对照人群与肝癌人群在HBV标志方面的这种差异更大，因此，HBV的准确迅速检测就显得十分重要，但是传统检测法存在敏感性比较差、费时、假阴性多等问题，而PCR高度敏感，因而可检出潜在的低水平HBV感染。

已有的PCR直接检测HBV    DNA，通常比较复杂、使用不便、且需花费较多时间。关键在于PCR检测前的血清样本处理存在一些缺陷。

本发明的目的是提供一种简单、快速、不加任何试剂的乙肝病毒基因扩增检测（HBV    DNA    PCR）前的样本处理方法。

本发明的技术解决方案是：一种乙肝病毒基因扩增检测前的样本处理方法：首先将血清样本在90℃-99℃下加热5-25分钟，再经离心后，吸取上清液作为血清中靶DNA。

本发明中的加热温度以94℃-95℃为佳，当然，也可采用其他合适的温度值。

本发明中的加热时间以10-15分钟为佳。

当然，也可采用其他合适的时间值。

本发明中离心时的离心速度1万转，离心时间2-5分钟，当然，也可采用其他合适的离心速度和离心时间。

本发明的优点是：快速、稳定可靠，重复性好。而且在处理血清时（PCR之前）无需加入任何试剂，除了简化操作、节约试剂、节省时间外，还使PCR操作人员不必接触有损健康的苯酚/氯仿等有机溶剂，可在没有防护设施的普通实验室内开展PCR操作，可避免经典法经常遇到的操作误差。更有利于普及推广应用。

下表即为本发明方法与其他方法的比较：

以下结合实施例对本发明作进一步说明：

例1：取50μl血清样品于94℃下加热15分钟，再12000rpm离心2分钟，吸取5μl上清液作为血清中靶DNA。

例2：取50μl血清样品于97℃下加热5分钟，再9800rpm离心3分钟，吸取5μl上清液作为血清中靶DNA。

例3：取50μl血清样品于95℃下加热10分钟，再10000rpm离心5分钟，吸取5μl上清液作为血清中靶DNA。

本发明中所取血清样品的量、加热温度、加热时间、离心速度、离心时间、及吸取上清液的量均可作合适的变化。以符合要求为准。